使⽤⾼灵敏度离⼦对LC-MS对PCR引物和探针试剂进⾏质量数确认和纯度分析

摘要 

在SARS-CoV-2⼤流⾏疫情中，业界使⽤RT-qPCR试剂盒进⾏常规感染检测。此类疾病监测⼯作受益于使⽤经认证 的⾼质量qPCR试剂。本应⽤纪要介绍了使⽤优化的IP-RPLC和符合法规要求的台式Tof仪器对SARS-CoV-2 CDC分 析中使⽤的PCR检测试剂进⾏的质量评估。借助这种灵敏的⽅法，能够从10 pmol的核⾐壳引物N1和N2（正向和 反向序列）以及N1和N2探针中收集⼤量纯度信息。所有PCR试剂均产⽣了尖锐、对称的峰。采集负离⼦质谱图 ，可轻松观察到多电荷物质（⾼达[M-10H]10-），使我们能够明确测定RT-qPCR试剂盒试剂的分⼦量。使⽤UV与 MS检测相结合的⽅法，评估试剂以及未纯化原料的纯度。因此，探讨了⼀个有趣的例⼦，即N2探针质量数漂移 42.9的杂质。总之，这种结合⾼分离度、⾼灵敏度LC-UV-MS的⽅法被证明提供了有益于RT-qPCR试剂认证的深层 次信息。