使用超高效合相色谱(UPC2 )分析短杆菌肽

用反相液相色谱(RPLC)分析疏水性肽和蛋白质难度很大，因为溶液中 经常需要使用洗涤剂保持疏水性物质的稳定性，而这些洗涤剂容易发 生聚集和/或沉淀，严重影响它们的回收，这些因素以及其它原因使 得难以用RPLC分离疏水性肽和蛋白质。 

在本应用纪要中，我们为您介绍一种在ACQUITY UPC2TM系统上使用沃特 世(Waters®)超高效合相色谱技术分离典型跨膜肽-短杆菌肽的方法。 

短杆菌肽是由芽孢杆菌产生的一种常见和已被良好表征的跨膜肽物质， 它被用作对抗革兰氏阳性和某些革兰氏阴性细菌的局部用抗生素，短 杆菌肽包括通用组成为甲酰-L-缬氨酸-甘氨酸-L-丙氨酸-D-亮氨酸-L-丙氨 酸-D-缬氨酸-L-缬氨酸-D-缬氨酸-L-色氨酸-D-亮氨酸-L-X-D-亮氨酸-L-色氨 酸-D-亮氨酸-L-色氨酸-氨基乙醇的一族化合物，其中X取决于短杆菌肽 分子，即分别占总短杆菌肽量约87.5%、7.1%和5.1%的革兰氏A(X=色 氨酸)、革兰氏B(X=苯丙氨酸)和革兰氏C(X=酪氨酸)，1需要交替的D 和L氨基酸单元构成β-螺旋状。 

我们研究了色谱柱化学品、流动相改性剂和梯度斜率对分离短杆菌肽 的影响。采用优化方法分离市场上销售的非处方药物(OTC)，将测定 的短杆菌肽浓度与标示量进行对比。采用质谱仪测定短杆菌肽的浓度， 采用选择离子谱表征每种物质。在ACQUITY UPC2 系统上使用我们的方法， 可得到线性和可重复的结果——测定的OTC制剂浓度为标示量的98.4%。