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常规反相色谱柱安装及使用维护指南

发布时间: 2014-09-29 16:16 来源:沃特世科技(上海)有限公司

何谓常规反相色谱柱?

在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C18、C8、C4或苯基等键合相的色谱填料所装填的色谱柱,按反相色谱条件进行操作和分离。反相是液相色谱中最常使用的分离模式,而C18柱是最常使用的反相色谱柱之一。

新色谱柱开启和安装的推荐步骤

  1. 使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统,确保系统干净,不含任何缓冲盐和污染物。
  2. 取用色谱柱时避免磕碰掉落。
  3. 将色谱柱入口端连接到系统上,柱出口端先不要连接,色谱柱身上有箭头标明正确流向。
  4. 在0.1 mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,然后在2分钟内将流速升至0.5 mL/min。
  5. 当溶剂均匀的从柱出口端流出,停流速,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以避免气泡进入检测系统,并且可快速达到基线平衡)。
  6. 重启流速,按照步骤4的方法逐渐提高流速,至常规分析时所使用的流速。
  7. 参考柱效测试报告中的方法,使用该流动相条件平衡色谱柱,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,直至压力与基线稳定。
  8. 测试柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物,请联系沃特世化学消耗品部门寻求支持,使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾,提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,需要进行故障排查。

柱清洗与再生的推荐步骤:

压力升高,色谱柱峰形发生变化如出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔,分离度降低,这些都强烈提示色谱柱受到污染。可采用以下步骤处理:

  1. 如系统接有在线过滤器和保护柱,首先排查在线过滤器与保护柱,进行更新替换。日常操作中,当压力升高10%或柱效降低10%时,就应考虑更换在线过滤器和/或保护柱。
  2. 使用高比例的有机溶剂进行冲洗(请注意避免盐析出,通常可使用梯度升高法,然后维持在高比例甚至100%有机溶剂条件下)。此操作通常可洗去大部分污染物。
  3. 如有机溶剂清洗不能解决问题,可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品性质以及你所了解的污染物性质选择清洗方法,用20倍柱体积(即,对于4.6x250 mm柱,相当于80 mL)的HPLC级溶剂清洗色谱柱,将流动相温度升至35-55˚C可提高清洗效率。

点击此处查看全文:如何预防色谱柱老化,色谱柱活化、开启、清洗和再生方法

标签:色谱柱 维护 活化 老化
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