优化的GlycoWorks HILIC SPE流程用于mAb型样品中N-糖的定量与稳定回收

Matthew A. Lauber、Stephan M. Koza 和 Kenneth J. Fountain，

沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市)

应用优势

■GlycoWorks HILIC μElution提取板提供了一种高效的多聚糖纯化装置

■采用优化的SPE条件定量并一致性地回收不同范围内的N-糖

■优化的SPE条件具有出色的方法稳定性

■可采用2-AB标记的多聚糖标准品确保样品制备和分析方法的性能

沃特世解决方案

ACQUITY UPLC^® H-Class Bio系统

ACQUITY UPLC GST Amide (BEH Glycan)色谱柱

GlycoWorks™ 96孔HILIC µElution提取板

多聚糖性能测试标准品

关键词 

N-糖，GlycoWorks，BEH glycan，多聚糖性能测试标准品，HILIC，HILIC SPE

简介

据估计，所有蛋白质中有一半以上都经过糖基化^1,2。这一翻译后修饰涉及寡糖的连接，其在许多生物过程中发挥着重要作用³。治疗性抗体是一类受糖基化影响突出的蛋白质，此类抗体中多聚糖图谱的改变可能导致其效能和免疫原性出现明显降低。因此，治疗性抗体的多聚糖图谱在细胞系选育过程中通常被作为关键性质量属性(CQA)进行评估，并且在开发和批量放行过程中必须进行监测。一套用于评价糖蛋白中N-糖的高效分析平台包括：通过PNGase F释放出多聚糖，采用具有荧光活性的2-氨基苯甲酰胺(2-AB)进行标记，然后采用亲水作用色谱法(HILIC)进行分离，最后由荧光检测器(FLR)进行检测。