使用µElution SPE和CORTECS UPLC色谱柱同时分析人血浆中的完整人胰岛素和五种类似物

发布时间： 2013-09-11 10:18 来源：沃特世科技（上海）有限公司

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Erin E. Chambers 和 Kenneth J. Fountain

沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德)

应用优势

♦CORTECS™ UPLC^®色谱柱可获得前所未有的高灵敏度和极窄的峰宽。
♦可进行选择性快速提取，无需耗费时间进行亲和纯化。
♦定量准确；精确度超越传统LBA方法。
♦高灵敏度。
♦高特异性，能够区分人胰岛素和赖脯胰岛素。
♦可对人胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素、谷赖胰岛素和地特胰岛素进行同步定量。
♦无需消化即可进行定量分析。
♦高效利用资产，允许使用现有LC/MS仪器。

沃特世解决方案

基于2D技术的ACQUITY UPLC^® I-Class系统

CORTECS UPLC C₁₈色谱柱

Oasis^® MAX 96孔µElution板

Xevo^® TQ-S质谱仪

MassLynx^® 软件

关键词

非特异性结合，大肽段，Oasis，样品制备，生物分析，定量，胰岛素，甘精胰岛素，赖脯胰岛素，UPLC，CORTECS，血浆

简介

胰岛素可能是最知名的，同时也是最早应用的多肽治疗药物之一。多种长效和速效类似物被开发出来，作为控制糖尿病的处方用药。以往，胰岛素等生物制剂的定量分析都是通过配体结合试验(LBAs)进行，例如ELISA。而LC/MS/MS相比LBA具有一定优势，例如开发时间更短、准确度和精度更高、多元用途、无交叉反应性，易于区分高度相似的胰岛素。由于离子化效率低、质谱灵敏度低，且由于存在多个稳定二硫键、碎片离子少，所以LC/MS/MS分析完整胰岛素尤为困难。此外，胰岛素及其类似物非特性结合和溶解度差的特点均增加了LC和样品制备方法开发的难度。现有的少数几种LC/MS/MS方法中，大多都需要进行费时的免疫亲和纯化和/或纳米流LC。对于定量分析胰岛素而言，区分人胰岛素和赖脯胰岛素(优泌乐)是一个非常特殊的挑战，因为它们之间的区别只是两个氨基酸的位置进行了互换。仅有一个低分子量的碎片才能区分两者，使得选择性的样品制备和色谱分析变得十分关键。

在本次研究中，利用混合模式固相萃取(SPE)和表面带有少量正电荷的高效实心核颗粒色谱柱，在消除干扰的同时提高了定量分析的灵敏度。此外，选择性研究结果表明，较高的人胰岛素水平(例如II型糖尿病患者可能出现的情况)并不会干扰赖脯胰岛素或其他任何类似物的定量分析。本文提供了一种可以对人血浆中完整人胰岛素和多种胰岛素类似物进行同步直接定量的简便方法(图1)，可实现50到200pg/mL的LOD。标准曲线中各点的平均准确度为99%到100%。QC样品的平均日间和日内准确度分别为98%和94%。QC样品的平均日间和日内精度分别为7.5%和5.3%。对所有类似物在六种人血浆源中的基质效应进行了计算，结果表明变异系数均小于15%，进一步证明了该方法的选择性。

利用CORTECS UPLC色谱柱改善分离度

Alliance iS HPLC系统－规格表

使用µElution SPE和CORTECS UPLC色谱柱同时分析人血浆中的完整人胰岛素和五种类似物

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