半制备规模单链RNA纯化

　　引言

　　寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98～99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中，杂质聚集在一起，即使是一般大小的21基体寡核苷酸的总产率也达到67～90%，较长链的寡核苷酸的产率相应较低。研究人员通常需要使用纯度高于初步合成混合物的材料。因此，用于基因敲除、基因分型和诊断目的寡核苷酸通常需要在合成后进行纯化。适合实验室规模寡核苷酸纯化的经济可行的解决方案很少，而现有的方法(比如离子交换色谱分析法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法)通常比较繁琐和费时。在本应用说明书中，我们介绍了一种成本低、速度快的中等数量材料的纯化方法，单次进样载量高达140 nmoles，采用沃特世 ACQUITY UPLC®系统和寡核苷酸分离技术(OST)色谱柱化学技术可达到95%以上的最终纯度。所提出的纯化规模与标准的寡核苷酸合成规模匹配良好(50至250 nmol)。下述方法可在15至30分钟时间内完成寡核苷酸纯化，得到高纯度产品。

　　结论

　　本文介绍的单链RNA寡核苷酸的纯化策略速度快，成本低，可生成高纯度材料。使用OST色谱柱化学技术和Alliance HPLC系统，大量的单链RNA粗产物可以在短时间内成功纯化，进而得到高纯度(约95%)的材料;根据所收集峰面积与样品总峰面积的比值进行估计，产率可达55%。

　　该方法对用于RNAi实验(这类实验中保证纯度和目标的特异性至关重要)的单链RNA的纯化极为有用。此外，由于T EAA的可挥发性，该策略可以将纯化的寡核苷酸储存，在没有T EAA这种不必要的盐的环境中，也可以避免其他纯化手段中产生的不必要的杂质。总的来说，该策略提出了一个比目前可用方法更优越的全面纯化方法。此外，在考虑样品纯化所需的时间成本、反应剂和沃特世XBridge OST色谱的寿命时，这种纯化方法非常经济。