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ACQUITY UPLC H-Class系统分离27种氨基酸
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摘要
沃特世的氨基酸分析技术在ACQUITY UPLC?系统上已经有了成熟的应用方法包。本文讲述了如何把已经成熟的ACQUITYUPLC方法转化到今年推出的ACQUITY UPLC H-Class系统上。
现有的ACQUITY UPLC(BSM)分析氨基酸的液相方法如下:
仪器：沃特世ACQUITY UPLC TUV系统
色谱柱：AccQ·Tag TM Ultra色谱柱,2.1x100mm,P/N:186003837
流动相A：AccQ·Tag Ultra洗脱液A液，用纯水稀释10倍
流动相B：AccQ·Tag Ultra洗脱液B液
梯度表：
| 时间(分) | A% | B% | 曲线 |
| 0 | 99.9 | 0.1 | — |
| 0.54 | 99.9 | 0.1 | 6 |
| 5.74 | 90.9 | 9.1 | 7 |
| 7.74 | 78.8 | 21.2 | 6 |
| 8.04 | 40.4 | 59.6 | 6 |
| 8.64 | 40.4 | 59.6 | 6 |
| 8.73 | 99.9 | 0.1 | 6 |
| 9.5 | 99.9 | 0.1 | 6 |
从ACQUITY UPLC(BSM)转换到ACQUITY UPLC H-Class(QSM)的计算过程使用沃特世ACQUITY UPLC方法转换器对梯度表进行重新计算，需要注意的是：ACQUITY UPLC H-Class QSM有一个新的功能：Pre-Injector Volume(进样器前体积)。在进行梯度转换时，需要在Dwell Volume(滞后体积)处输入QSM系统的实测数值(0.355ml),得到转换后的梯度表:
| 时间(分) | A% | B% | C% | 曲线 |
| 0 | 100 | 0 | 0 | — |
| 0.29 | 99.5 | 0.5 | 0 | 11 |
| 5.49 | 90.9 | 9.1 | 0 | 7 |
| 7.49 | 78.8 | 21.2 | 0 | 6 |
| 7.79 | 0 | 59.6 | 40.4 | 6 |
| 8.39 | 0 | 59.6 | 40.4 | 6 |
| 8.48 | 100 | 0 | 0 | 6 |
| 9.25 | 100 | 0 | 0 | 6 |
| 10 | 100 | 0 | 0 | 6 |
实验讨论：
1.使用QSM系统自带的ACQUITY UPLC Calculator将ACQUITY UPLC BSM的方法很方便地转换到ACQUITY UPLC H-Class上，再以此为起点作适当的调整，能够得到满意的结果。
2.考虑到QSM四元梯度的优势，将梯度表中用高比例乙腈冲洗色谱柱的一行，改为乙腈和水，(与原HPLC的AccQ·Tag方法相同)，目的是降低缓冲盐的过柱量,降低柱压,减少污染。
3.原BSM的起始梯度是99.9%的A液和0.1%的B液,是为避免二元高压梯度的某一个泵从静止状态启动会造成较大的压力脉动和梯度的不重现; 调整后的梯度表将起始比例改为100%A液，这也是四元梯度的优势。好处是：梯度从100%A液启动有利于衍生剂峰AMQ及前几个对有机相比例敏感的弱保留组份有较好的峰形和稳定的保留时间重现性。
