AnnexinV/PI双染流式凋亡技术服务

在正常细胞中，***脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡zei早期，膜***脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种***脂结合蛋白，与***脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。***化丙***（Propidium Iodide, PI）或7-AAD是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI或7-AAD能够透过细胞膜而使细胞核染色。因此将Annexin V与PI或7-AAD匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

服务内容：

1. 细胞培养。     
2. 流式凋亡检测。

1. 用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
2. 细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上***脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
3. 细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
4. 加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
5. Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
6. PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
7. 上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。

1. 检测细胞株（若实验室有，可免费提供）。
2. 待测毒性药物（根据实验方案有无）。
3. 实验设计方案或参考文献。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途