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毫克级抗体快速表达

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❀实验流程

1. 亚克隆:将客户优化好的目的基因(吉锐生物也可以提供基因优化服务)克隆到吉锐生物定点整合载体上;
2. 转染:采用独家的 CHO-MCI(多拷贝整合)技术,将定点整合载体电转到 CHO-SC 细胞中;
3. 稳转池验证:30ml 摇瓶小试表达目的蛋白并纯化。将细胞培养上清通过合适的,可与重组表达目的蛋白的标签结合的柱填料进行纯化,SDS-PAGE跑胶,同时通过上牛血清白蛋白(BSA)作为对照带进行定量和纯度分析。
4. 扩大培养:根据 30 ml 的定量结果,估算获得客户要求数量的蛋白所需要扩大培养的体积,拿到足够量的蛋白。

❀实验案例

案例1:

案例2:
  利用 MCI 技术将红色荧光蛋白基因定点整合到 CHO-K1 细胞基因组中,配合使用 Genloci® 的独创产品 Cell Plaza™(GP5036)筛选阳性克隆,扩大培养后,在倒置显微镜下和荧光显微镜下观察细胞。

 

 

 


案例3:
      利用 MCI 技术将客户的目的基因整合到 CHO 细胞基因组中,配合使用 Genloci® 独创产品 Cell Plaza™(GP5036)筛选阳性克隆,ELISA 结果分析显示,在挑选的 32 个克隆中,共有 16 个克隆的抗体表达量较高,其中 3 个克隆的表达量超过 12.5ng/mL。

案例4:表达pool验证
      抗体Y 125mL摇瓶pool上清SDS-PAGE检测见figure 3,CHO-SC上清纯化后可得蛋白 272mg/L,同样条件传统CHO-S上清纯化后可得蛋白 125mg/L。生产周期4-5周,产量达到mg/10mL,满足很多客户要求,省去了很多等待时间。

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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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