免疫共沉淀(Co-IP)

 免疫共沉淀(Co-IP) 

服务简介：

染色质免疫沉淀技术（ChromatinImmunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。特别是近年来由于该技术不断的发展和完善，其应用范围已经从研究目的蛋白与已知靶序列间的相互作用，发展到研究目的蛋白与整个基因组的未知序列的相互作用；从研究一个目的蛋白与DNA的相互作用，发展到研究两个蛋白与DNA共同结合的相互作用；从研究启动子区域的组蛋白的修饰，发展到研究结合在DNA序列上的蛋白复合物。随着对基因功能研究的不断深入，这项技术正越来越多的被应用于科研的各个领域

ChIP-qPCR技术实现了在靶基因的启动子上找到转录因子结合的直接证据，是细胞内真实的、原位的结果，相对于EMSA、luciferase报告载体等体外实验验证更具说服力。

1、服务内容

（1）、温和条件下进行蛋白抽提，BCA定量，调整蛋白浓度

（2）、样品预处理：用Protein A/G Sepharose孵育

（3）、样品与IP抗体进行孵育

（4）、洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物进行变性处理

（5）、沉淀产物SDS—PAGE或者WB鉴定（目前暂无其它鉴定）

（6）、Western blot检测

① 电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品

② 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

③ 杂交：用抗体鉴定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）

④ 化学发光检测（ECL），胶片曝光，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）

（7）、预实验及正式实验服务

2、样品要求（样品处理及保存见附件）

（1）、细胞＞1×107；组织＞100mg；细菌湿重＞50mg；植物＞100mg；血清＞50ul

（2）、样品蛋白浓度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/样品

3、客户提供材料

(1)、新鲜或正确保存的样品

(2)、目的蛋白一抗

(3)、阳性对照样品（尽量提供）

(4)、相关文献（可选）

4、提交给客户结果

(1)、预实验曝光结果（胶片及扫描图），预实验采取2个一抗稀释度

(2)、正式实验曝光结果（胶片及扫描图）

(3)、完整实验报告

(4)、IOD值分析报告（可选）

5、服务说明

(1)、待检测样品可以是待检测蛋白样品，也可以是细胞、组织等其他样品；

(2)、免疫沉淀用抗体；

(3)、检测用抗体；

6、对照设置

(1)、空白：无抗体，只有protein A/G

(2)、阴性对照：无蛋白，有抗体及protein A/G

(3)、阴性对照：未转染细胞或者基因敲除样品

(4)、无关空白抗体

(5)、蛋白裂解液上清：Input

实验项目及费用

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途