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基本原理
1.替代瞬时表达载体使用;
2.lentivirus-shRNA/miRNA经慢病毒包装,转染(难于转染的细胞系)如原代/悬浮/处于非分裂的细胞,整合到受感染细胞的基因组,长时间稳定表达miRNA。
服务流程
1.客户提供:表达miRNA/shRNA的质粒(提供测序图谱)或者所要Konckdown的靶基因的名称、序列;所需的病毒滴度及总量、病毒是否需要纯化;若需要检测靶基因的表达变化,如需要请提供相应的抗体。
2.含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取;
3.慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞;
4.培养48-72小时,收集上清;
5.病毒的纯化和浓缩;
6.滴度测定、目的基因鉴定;
7.将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达;
8.我们提供:重组后的慢病毒载体质粒,并附上PCR鉴定结果;提供已测定的滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液。
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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途