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DNA甲基化检测服务

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可以做哪些实验,检测什么? 可以用哪些耗材和试剂?

 DNA甲基化检测

 

    DNA甲基化是zei早发现的基因表观修饰方式之一,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧***,即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧***转变为5’-甲基胞嘧***。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰方式在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。脊椎动物DNA的甲基化状态与生长发育调控密切相关,比如在肿瘤发生时,抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加,CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态,导致抑癌基因表达的下降。

DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分,在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用。

1. MassARRAY飞行时间质谱平台甲基化检测原理:

MassARRAY 分子量阵列基因分析系统EpiTYPER DNA甲基化分析技术结合了碱基特异性酶切反应和MALDI-TOF测序原理。两者的完美结合使得该技术成为高准确性、高通量及高灵敏度的DNA甲基化定量分析手段。

MassARRAY分子量阵列基因分析系统EpiTYPER DNA甲基化分析技术是高通量DNA甲基化定量技术。实现多重CpG的甲基化位点的定位定量检测。配套的EpiTYPER软件为用户提供便捷的数据分析和报告工具。

1.1 飞行时间质谱原理:

质谱仪简单来说就是把不同的分子按照分子量进行排序的仪器。

我们的质谱是Maldi-Tof质谱,全称是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱。将制备的样品分析物与芯片基质共结晶,将该晶体放入质谱仪的真空管 , 而后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发,由于基质分子经辐射所吸收的能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子,产生的离子多为单电荷离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能,进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率加以分离,在真空小管中飞行到达检测器。MALDI产生的离子常用飞行时间(Time-of-Flight,TOF)检测器来检测,不同分子量的分子飞行时间也不同,分子量越大飞行时间越长,根据飞行时间进而判断分子量大小。通过对物质的分子量进行检测,达到区分、鉴别物质的目的。

1.2 利用飞行时间质谱检测甲基化原理:

实验从亚硫酸盐处理待测DNA开始。经过亚硫酸盐处理DNA中的未甲基化的胞嘧***(C)转变为尿嘧***(U),由此在DNA模板中产生了甲基化特异的序列变化。利用5末端带有T7-启动子的引物进行PCR扩增。产物经虾碱性***酸酶(SAP)处理后用于碱基特异性的酶切反应。酶切后DNA片段的大小和分子量取决于亚硫酸盐处理后的碱基变化。配套软件EpiTYPER则能提供数字和图像注释工具,能将实验数据与客户提供的DNA序列相吻合。作为内在的质量控制机制,该系统还包括了基本统计学分析方法及数据可靠程度的评估手段,自动报告每个相应片段的甲基化程度。

注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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