NFAT-RE-Luci稳转细胞株

货号：CS001 NFAT（Nuclear Factor of Activated T cells）转录因子家族在免疫反应中对多种细胞因子的表达有重要作用，也参与了肿瘤免疫、心肌功能调控、凋亡等多种功能。包括钙调蛋白和蛋白激酶C在内的多种信号通路都可以通过NFAT发挥作用。 NFAT-RE-Luci稳转细胞株的基因组中稳定整合NFAT控制表达的luciferase基因。NFAT激活启动luciferase表达，通过检测luciferase活性可以灵敏地反应NFAT通路的状态。

 

 

产品资料：

品名：NFAT-RE-Luci稳转细胞株 
原始细胞株：HEK293V（HEK293T亚克隆） 
所用载体：pLV-NFAT-ER-Luci（见图1） 
构建方法：慢病毒转染构建 
抗性：puromycin
克隆属性：单克隆细胞株

 

构建方法简介：

将pLV-NFAT-ER-Luci包装为慢病毒，感染HEK293V细胞。用嘌呤霉素筛选出多克隆株后，将多克隆细胞株用有限稀释法挑选单克隆细胞株。对单克隆细胞株的形态和增殖性进行初步选择后，采用PMA+Ionomycin刺激处理检测细胞克隆对NFAT激活的反应性。获得低背景，高反应的NFAT活性检测单克隆细胞株。



图1、pLV-NFAT-RE-Luci载体图谱



图2、NFAT控制的Luciferase表达框。启动子由3个NFAT结合位点（NFAT BD）和一个minimal启动子组成，控制下游luciferase表达。

 

NFAT活性检测稳转细胞株功能实验

实验步骤：

1、将NFAT-RE-Luci稳转细胞株铺到24孔板，密度50%左右。分为对照组和实验组，每组3个重复。

2、24h后实验组加PMA 10ng/ml，ionomycin 0.5uM。对照组不加。

3、处理24h后裂解细胞，收集细胞裂解液进行luciferase活性检测。





图3、NFAT-RE-Luci稳转细胞株功能检测实验结果

 

 

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途