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MTT与细胞增殖毒性分析

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MTT(噻唑兰 )法

    原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。DMSO能溶解细胞中的蓝紫色结晶物,用酶联免疫检测,以在490nm波长处测定其吸光度,可间接反映活细胞数。在一定细胞数范围内,MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。此法已经广泛应用在一些生物活性因子的活性检测、 抗肿瘤药物的筛选、细胞毒性试验和肿瘤***敏感性的测定等。

    注意事项:用此法测细胞活力,为保证结果的准确性,zei好在试验前测定每种细胞的贴壁率,倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,再确定每孔细胞接种数和培养时间,以保证培养终止时不会过满。另外,实验时注意: 

1)   细胞数:根据各细胞生长时间和速度及药物作用时间种合适的细胞数

2)   血清:测定细胞因子等对细胞生长影响时需要采用低浓度血清或无血清

3)   空白对照:设置药物刺激的空白对照,并作为比色的空白调零

4)   药物介质对照:派出药物溶解介质的干扰需同时加入药物介质对照

   

                      

                                      

图:考虑以上注意因素并排出后,根据不同药物浓度得出两种药物的抑制率曲线及方程,zei后得出每种药物作用的IC50(抑制率为50%)点的药物浓度。

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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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