服务步骤

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交付时间

目的基因全基因合成

1. 从GenBank中寻找目的蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化。
3. 合成设计好的基因序列。

目的基因（连接在T载体或其它常规克隆载体上）及测序报告。

2周

目的基因亚克隆

1. 培养并抽提含有目的基因的载体质粒。
2. 将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证表达质粒的准确性。

正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

2-3周

E. coli 表达菌株转化及筛选

1.培养并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化至高效的E. coli表达菌株中。
3. 至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并摸索合适的条件，SDS-PAGE 检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株。

重组质粒的表达菌株及表达检测报告

2-3周

目的蛋白表达及纯化

1. 对蛋白表达时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，并诱导表达目的蛋白。
2. 摇瓶培养1L重组细菌，通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（可选，注：构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点），再纯化获得所需的目的蛋白。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制zei终产品质量。
5. .通过Western-blot验证目的蛋白正确性。

≥1mg纯化好的目的蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白，纯度zei高可达95%以上。 

2-3周

目的蛋白的再加工及详细检测

（单独收费）

1. 对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
2. 内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。
3. 通过HPLC，质谱等方法详细检测目的蛋白的质量

加工后的终产品及相关实验和检测报告。

2-3周