DNA是遗传信息的载体，是zei重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此DNA的提取是分子生物学实验技术中zei重要、zei基本的操作 。
DNA提取的几种方法

染色体DNA的提取
CTAB法
SDS法
其它

非染色体DNA的提取
质粒DNA的提取
碱裂解法
煮沸法

线粒体、叶绿体DNA的提取
差速离心结合SDS裂解法

基因组DNA－ CTAB法

CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）

CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。

该复合物在高盐溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的
        植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。

基因组DNA－ CTAB法
CTAB提取缓冲液的经典配方

组份     Tris-HCl   （pH8.0）    　EDTA （pH8.0）     NaCl     CTAB    β-***
终浓度     100 mM      20 mM     1.4M    2%(W/V)    0.1%（V/V）使用前加入

Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；
CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；
β-***是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除

CTAB提取缓冲液的改进配方

组份     Tris-HCl （pH8.0）    　EDTA （pH8.0）    NaCl     CTAB     PVP40    β-***
终浓度     100 mM      20 mM    1.4M    3%(W/V)    5%(W/V)    2%（V/V）使用前加入

PVP（聚乙***）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。

SDS法原理
SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；
提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

SDS法DNA提取缓冲液
组份    Tris-HCl （pH8.0）    　EDTA （pH 8.0 ）    　NaCl       SDS
终浓度      10 mM       20 mM       0.4M       2%

DNA提取常见问题
问题一：DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。
原因：
DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质
DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应
DNA中残留有金属离子
对策：
重新纯化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等杂质（具体方法见前）
重新沉淀DNA，让酒精充分挥发
增加70％乙醇洗涤的次数（2-3次）

问题二：DNA降解。
原因：
材料不新鲜或反复冻融
未很好抑制内源核酸酶的活性
提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断
外源核酸酶污染
反复冻融
对策：
尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融
液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液
在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量
细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔
所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌
将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复冻融

问题三：DNA提取量少。
原因：
实验材料不佳或量少
破壁或裂解不充分
沉淀不完全
洗涤时DNA丢失
对策：
尽量选用新鲜（幼嫩）的材料
动植物要匀浆研磨充分；G＋菌、酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁
高温裂解时，时间适当延长（对于动物细胞、细菌可增加PK的用量）
低温沉淀，延长沉淀时间
加辅助物，促进沉淀
洗涤时，zei好用枪头将洗涤液吸出，勿倾倒

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