无创肿瘤ctDNA基因突变检测-WNLH-20150923

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　　一、项目介绍

　　1、肿瘤ctDNA介绍

　　《ASCO年度报告：2015临床肿瘤学进展》中，液体活检技术被列为肿瘤治疗领域下一个十年趋势之一。ctDNA作为液体活检的首选已逐渐从科研走向临床。而欧盟批准将ctDNA检测用于易瑞沙的伴随诊断则更是标志着ctDNA临床应用的大规模实现。

　　循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA, ctDNA)是人体血液循环系统中的肿瘤基因组片段DNA，ctDNA包含整个肿瘤基因组信息。早在1947年，比DNA双螺旋结构发现还早6年的时候，Mandel和Metais就发现血浆中存在游离的核酸分子;1977年，Leon等人发现，肿瘤患者的血浆游离DNA水平要明显高于健康人群;可是，又过了17年，人们才发现这种携带了突变信息的循环DNA是肿瘤的标志。人们逐渐明白，cfDNA中携带肿瘤特有突变的那一小部分DNA，确确实实是由肿瘤细胞释放出来的，ctDNA的研究终于与肿瘤关联起来。

　　2012年英国萨顿癌症研究所Perkins首次从晚期肿瘤病人的外周循环血浆DNA中，成功检出肿瘤体细胞突变，该结果与匹配的石蜡肿瘤组织样本完全吻合。研究发现外周循环血浆DNA水平与病人预测生存期相关，证实设计优良飞行时间质谱方法在肿瘤活检不能反复进行时，能通过扫描外周循环血中肿瘤DNA找到标志物。

　　2、质谱技术检测肿瘤ctDNA技术原理

　　质谱超高灵敏度检测方法技术在集合靶向PCR、单碱基延伸和质谱检测技术基础之上利用链亲和素磁珠吸附法，捕捉有生物素标记的探针，只有突变的等位基因才能延伸并被捕获。该方法可以降低背景噪音，提高检测灵敏度达0.5%频率突变。40 ng DNA/每个样本。

　　突变特异的单碱基延伸反应

　　利用链亲和素磁珠吸附法，捕捉有生物素标记的探针

　　极大降低背景噪音，提高检测灵敏度