当前，microRNA对靶基因的功能研究十分热门。利用荧光素酶报告基因检测实验寻找或验证microRNA对靶点作用性是不可或缺的实验技术。英拜生物可为您提供microRNA报告基因载体构建服务，并可进一步为您提供荧光素酶报告基因检测实验服务。您只需要提供目的microRNA靶位点序列，本公司专业技术服务人员就可替您完成载体构建，为您节省大量的时间和精力。

   下图为microRNA-reporter和microRNA-control载体表达框架示意图，报告载体表达萤火虫荧光素酶，并在其3’端具有克隆位点，方便插入靶基因3’UTR序列。内参照载体采用海肾荧光素酶作为报告基因，用于进行归一化处理和阳性筛选。

 microRNA-reporter载体　　　     　　　　　　           microRNA-reporter control载体

英拜生物microRNA报告基因实验流程：

1.microRNA靶点的预测

利用Targetscan,miRanda,PicTar软件得到目的microRNA的预测靶点序列(客户提供)。

2.获得microRNA对应DNA模板

根据提供的靶序列，合成两条互补的单链DNA模板。或者，设计引物PCR扩增目的microRNA靶基

因3’UTR序列。

3.microRNA靶序列克隆

将合成的两条单链退火成双链（具有粘性末端），或将PCR产物双酶切，后连入经过同样双酶切

的miR-reporter载体中，连接产物转化大肠杆菌DH5α。

4.阳性克隆鉴定。

挑选转化的菌落，PCR筛选含有插入片段的阳性克隆，测序验证克隆的序列和目的microRNA靶序

列一致。

5.细胞转染准备

将含目的microRNA靶基因的报告基因载体、内参质粒和microRNA　mimics或microRNA

negative control共转染293T或Hela细胞。

6.荧光素酶检测

共转染细胞24-72h后，进行双荧光素酶检测，即同时检测firefly luciferase和renilla

luciferase活性，确定目的microRNA的靶基因。

7.突变实验

构建miR-reporter载体（含突变靶位点的荧光素酶报告基因载体）与内参质粒、microRNA

mimics或microRNA negative control共转染293T或Hela细胞。共转染细胞24-72h后，进行双

荧光素酶检测，进一步验确定目的microRNA的靶基因。

8.整理分析数据，得出结论。

提供有microRNA靶序列的报告质粒，以及内参和对照质粒各一份。甘油保存菌株各一支。附

miR-reporter载体的说明书，以及实验报告，包括载体构建过程，鉴定记录，测序报告，细胞

转染，荧光检测。

注：

microRNA　mimics与microRNA negative control由客户提供或由本公司代购（Dharmacon公

司),也选用Pre-miR 与Pre-miR negative control（Ambion）或构建microRNA过表达载体及对

照载体（本公司可以构建

microRNA靶基因验证85折优惠酬宾信息由上海英拜生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于microRNA靶基因验证85折优惠酬宾报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途