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lncRNA荧光定量PCR实验
长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)是一类长度超过200nt的非编码RNA分子。哺乳动物基因组序列生成的转录本中约有4%~9%是 lnc RNA,而1%为编码RNA。多数lnc RNA生成与 m RNA 类似,都由RNA 聚合酶Ⅱ转录和剪切,生成 poly(A)尾。lnc RNA主要定位于细胞核中,少数分布在细胞质。lncRNA可通过多重机制调控基因的表达,包括基因印记、基因重组、染色质重塑、细胞周期调控、转录干扰、剪接调控、mRNA降解和翻译调控等。主要在表观遗传学调控、转录调控和转录后调控这三个层面进行调控, 在细胞生长、分化和个体发育,以及疾病和肿瘤中扮演重要角色。
图1. lnc RNA的可能来源
A) 蛋白编码基因的框架中断,形成一段包含之前一些ORF的lnc RNA ; B)染色质重组后,重组前未转录的分离很远的序列连接在一起,生成有功能的 lnc RNA; C) 通过反转录复制一个非编码基因, 产生功能性非编码逆转录基因或非功能性非编码逆转录假基因; D) nc RNA内部发生串联重复产生 lnc RNA; E) 基因中插入一个转座成分生成有功能的非码 RNA
图2. 根据lncRNA在基因组上相对于蛋白编码基因的位置,将其分为sense、antisensebidirectional、intronic、intergenic这5种类型
图3. lncRNA的功能
lncRNA定量PCR实验流程如下:
1、样品RNA抽提
2、RNA质检
3、RNA逆转录cDNA
4、lncRNA特异性引物设计及调试
5、lncRNA PCR扩增
6、PCR数据统计
只要您提供样本及待检测的lncRNA名称,本公司可为您完成后续的所有实验。
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