免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

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一、主要实验步骤

1. 蛋白质抽提

2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。

3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)：将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。

4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜：按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。

5. 膜的封闭和抗体孵育

6. 化学发光法检测：将A和B两种试剂等体积混合，均匀的加在膜上。数分钟后使用化学发光凝胶成像仪进行曝光，拍照。

7. 数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。

二、实验周期
    3-4周（样本量大、指标数多实验周期会延长）

三、实验收费
    960元/膜（每张膜跑8样本，客户提供目的蛋白一抗）
    

四、实验结果
   1、 实验报告，包括详细的实验方法所用仪器、试剂（word格式）
   2、 目的蛋白及内参条带图片（PNG格式）
   3、 灰度值文件（Excel格式）
 

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