细胞免疫荧光-细胞免疫荧光染色步骤

细胞免疫荧光

一、细胞免疫荧光服务介绍
  
      免疫荧光技术服务（Immunofluorescence technique）又称免疫荧光抗体染色，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是基于免疫学、生物化学和显微镜技术建立起来的一项技术。由于抗原-抗体反应具有高度的特异性，我们不仅能够看到待测样本中目的蛋白的位置，同时也能通过荧光的强度推测反应蛋白的含量。如果使用两种以上的抗体进行染色，我们可以观察到多种蛋白在组织中的分布，以及相互作用关系等。用于标记蛋白的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄（FITC），四乙基罗丹明（RB200）和四甲基异硫氰酸罗丹明（TMRITC）。
       直接染色法：
    将标记的特异荧光抗体直接滴加在抗原标本上，经过一定时间的染色。洗去多余的荧光抗体，在荧光显微镜下便可以观察到由于抗原抗体结合而发出的荧光。此方法操作简单，实验流程短。缺点是：一种标记抗体只能检测一种抗原，敏感性略差，使用此方法应设置阳性和阴性对照。 
       间接染色法：
   使用此方法检测的时候，先用未标记的一抗与抗原标本进行反应，反应一段时间后洗去多余抗体，再使用标记有荧光的二抗抗体与一抗反应。如果第一步中的抗原和抗体互相反应，则会形成抗原-一抗-二抗的复合物，再洗去未反应的标记抗体，在荧光显微镜下便能够看到荧光。
 
二、细胞免疫荧光服务内容  
 
1.已转染72h的细胞种于共聚焦专用培养皿里，预冷PBS洗三遍，每次5分钟； 
2. 细胞半干时，覆盖以4%冷的多聚甲醛固定15分钟，避光；
3.吸去多聚甲醛后，用预冷PBS洗三遍，每次5分钟；
4. 0.5% Triton X-100覆盖细胞10分钟，预冷PBS洗三遍，每次5分钟；
5. 与二抗相同宿主的血清室温封闭30分钟；
6. 配制一抗：SAB + FBS = 1:200；
7.加入一抗覆盖细胞，锡纸包裹4℃避光过夜； 
8.取出细胞复温至室温约1 h；
9.冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；
10.配制荧光标记二抗：用FBS配制，浓度1:200； 
11.加入二抗，室温孵育1小时，避光；
12. 冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；
13.DAPI染核，每皿1滴，完全覆盖住细胞即可；
14. 冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；
15.加入防荧光淬灭封片剂封片，避光；
16.上机confocol。 
 

细胞免疫荧光染色结果

 
三、细胞免疫荧光 服务说明

1. 签订实验协议；

2. 客户提供：
1） 客户可以提供已经制备但未做进一步处理的细胞爬片、石蜡切片、冰冻切片等；
2） 客户可以提供组织样品，委托我们完成样品切片的制备；
3）客户可以自行提供抗体，也可使用公司抗体库中抗体。

3. 实验周期及服务费用因样品的数量而改变，具体详询本公司。
 

四、细胞免疫荧光服务质量承诺  
 
1．返还未使用的客户提供的抗体；
2．真实的实验原始数据；
3．权威的检测报告；
4．详细完整的实验流程。
 

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途