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参考报价: | 面议 | 型号: | RNAi |
品牌: | 沃登医学 | 产地: | 上海 |
关注度: | 2 | 信息完整度: | |
样本: | 典型用户: | 暂无 |
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RNAi
一、RNAi服务介绍
研究表明,将与mRNA同源的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,从而抑制其相应基因的表达。这种转录后基因沉默机制(Post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。由于RNAi具有高度的序列专一性,可以特异地使特定基因沉默,获得功能丧失或降低突变,因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具,用于功能基因组的研究。
我们应用国外知名公司的RNAi Designer平台,可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析,完成siRNA/miRNA多种序列的的设计,并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。
二、服务内容:
1、siRNA合成:
对于瞬时基因沉默实验,化学合成siRNA的方法操作简便,容易获得高水平的瞬时沉默效果,特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性;针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到75%(染效率大于80%的情况下)。
实验流程:
1)根据序列信息,进行化学合成 ;
2)纯化及定量 ;
3)冻干处理 ;
4)细胞转染预实验,优化转染条件;
5)瞬时转染或稳定转染 ;
6)RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化 。
2、质粒载体shRNA的构建:
构建shRNA表达载体,实现shRNA在细胞中稳定表达,能够弥补瞬时转染持续时间短的不足。
实验流程:
1)mRNA序列分析;
2)引物设计及合成;
3)单链互补引物退火;
4)将片段克隆至载体;
5)测序以确保插入序列正确性;
6)向客户提交测序结果与实验方法报告单。
3、microRNA干扰载体构建:
RNAi载体表达可以稳定地研究基因功能,载体在细胞种持续抑制靶基因的表达可达数星期甚至更久。 RNAi载体利用细胞内源性的miRNA加工机制,相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构。每个基因设计的4条序列,我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的Knockdown效率(在转染效率大于80%的情况下)。
实验流程:
1)针对特定基因,设计micro RNAi序列,合成该序列并退火生成双链DNA;
2)将DNA与载体连接并转化 ;
3)测序验证miRNA序列的正确性 ;
4)细胞转染预实验,优化转染条件 ;
5)瞬时转染或稳定转染 ;
6)RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。
4、RNAi干扰效果检测:
应用RT-PCR方法检测mRNA水平的基因敲除效果;通过Western blot方法检测蛋白水平的基因敲除效果。
三、服务说明
1、siRNA合成
客户提供:
1)目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat种属)以及技术要求(包括OD和nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等)
2)细胞株和详细的细胞培养的操作步骤
3)一抗(如果需要Western blot检测)
注:普通siRNA:均有HPLC纯化,100%除去尚未配对的单链 ;化学修饰siRNA:利用修饰以提高siRNA在血清和培养基种的稳定性;荧光标记siRNA;siRNA对照:普通阴性对照、荧光标记的阴性对照(易观察,可观察转染效率)和siRNA阳性对照(作为一个实验系统检查,确保在您的实验方法是可靠的;
2、质粒载体shRNA的构建
客户提供: 待研究mRNA序列信息。
3、microRNA干扰载体构建
客户提供:
1)目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat种属)
2)细胞株和详细的细胞培养的操作步骤
3)一抗抗体(如果需要Western blot检测)
4、服务价格与周期:
四、质量承诺:
1、siRNA合成:
1)转染效率分析 ;
2)Knockdown结果。
针对靶基因设计的3条siRNA可保证其中2条的Knockdown效率达到75%(在转染效率大于80%的情况下)。
2、质粒载体shRNA的构建:
1)阳性克隆质粒;
2)阳性克隆甘油菌;
3)测序报告以及实验方法报告。
3、microRNA干扰载体构建:
1)构建好的表达载体和相应的甘油菌;赠送阴性对照甘油菌 ;
2)测序报告 ;
3)转染效率分析 ;
4)Knockdown结果。
针对某靶基因设计的3条miRNA序列,在转染效率 > 80%的前提下,我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率服务流程 。
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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途