一、服务介绍

分子克隆是在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。

二、实验原理

外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有—种大肠杆菌连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。

    T4噬菌体DNA连接酶催化DNA连接反应分为3步：，T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶—AMP复合物；然后，酶—AMP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。

    DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法，为了防止载体本身的自连，可以通过(牛小肠碱性磷酸酶)CIP处理克服。

    连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性.但是在这个温度下，粘性末端的氢键结合是不稳定的。因此人们找到了一个折中温度，即12-16℃，连接12-16h(过夜)，这样既可大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。

三、实验流程

目的DNA的扩增和纯化；

连接反应；

电泳检测连接产物。

四、客户提供

样本DNA，基因序列，试剂盒。

五、公司提供

构建好的载体，电泳胶图，测序结果。

实验周期：大约1-2月。

1.严格的质量控制：标准的质粒构建流程（SOP）和规范的QC质检体系，确保服务的快速与精确。

2.高质量：超螺旋质粒。

3.范围选择灵活：可以交付给客户不同质量级的质粒和高拷贝或低拷贝的质粒。

4.极低的内毒素水平：特有的内毒素去除技术，可以使质粒内毒素含量达到医药级水平(<5EU/mg)。

实验外包:

1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析

2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq

3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA

6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选

7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR

8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

目前，基尔顿生物科技（上海）有限公司，主营实验技术服务、SCI论文服务、动物模型构建、细胞株、elisa试剂盒等，欢迎广大科研爱好者前来咨询选购！

基尔顿生物服务优势：我们拥有专业的实验室、先进的实验设备和经验丰富的科研技术人员。技术团队包括研究员（博士后）2人，助理研究员（博士）4人，核心研究员（硕士）15人，主要致力于基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用与推广。通过高度细分、全方位的服务平台，为广大客户提供了完善的技术解决方案和服务。目前，协助发表的SCI及国家核心期刊上的学术论文达两千余篇，涉及临床医学、肿瘤生物学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学、医学等诸多领域。

更为可喜的是，公司于2015年投资建立了1800平方米的动物中心，能够为广大客户提供更为专业的实验动物饲养及造模服务。

分子克隆与质粒载体构建信息由基尔顿生物科技（上海）有限公司为您提供，如您想了解更多关于分子克隆与质粒载体构建报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途