RNAi技术服务

RNAi技术服务： 
近年来的研究表明，将与mRNA同源的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA（dsRNA）导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，从而抑制其相应基因的表达。这种转录后基因沉默机制（Post-transcriptional gene silencing, PTGS）被称为RNA干扰（RNAi）。由于RNAi具有高度的序列专一性，可以特异地使特定基因沉默，获得功能丧失或降低突变，因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。
上海基尔顿生物应用国外知名公司的RNAi Designer平台，可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析，完成siRNA/miRNA多种序列的的设计，并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

a，siRNA合成
对于瞬时基因沉默实验，化学合成siRNA的方法操作简便，容易获得高水平的瞬时沉默效果，特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性；针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到75％（在转染效率大于80％的情况下）。
在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex，RISC）。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA 3’端12个碱基的位置切割mRNA。

实验流程：
1）根据序列信息，进行化学合成；
2）纯化及定量；
3）冻干处理；
4）细胞转染预实验，优化转染条件；
5）瞬时转染或稳定转染；
6）RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

客户提供：
1） 目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat种属）以及技术要求（包括OD和nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等）；
2） 细胞株和详细的细胞培养的操作步骤；
3） 一抗（如果需要Western blot检测）。

我们提供：
1）转染效率分析；
2）Knockdown结果。

质量保证：
针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中2条的Knockdown效率达到75％（在转染效率大于80％的情况下）。

b，构建shRNA
 
构建shRNA表达载体，实现shRNA在细胞中稳定表达，能够弥补瞬时转染持续时间短的不足。
服务流程：
1）mRNA序列分析；
2）引物设计及合成；
3）单链互补引物退火；
4）将片段克隆至载体；
5）测序以确保插入序列正确性；
6）细胞转染预实验，优化转染条件；
7）瞬时转染或稳定转染；
8）RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

客户提供：
1） 目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat种属）；
2） 细胞株和详细的细胞培养的操作步骤 ；
3） 一抗（如果需要Western blot检测）。

我们提供：
1） 构建好的表达载体和相应的甘油菌；赠送阴性对照甘油菌；
2） 测序报告 ；
3） 转染效率分析 ；
4） Knockdown结果。

质量保证：
针对某靶基因设计的3条shRNA序列，在转染效率>80％的前提下，我们保证至少有1个克隆可以达到70％转录水平的沉默效率。

c，构建shRNA 
RNAi载体利用细胞内源性的miRNA加工机制，相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构，并具有采用GFP进行表达追踪的优点。每个基因设计的4条序列我们保证至少有2条可以达到至少70％转录水平的Knockdown效率（在转染效率大于80％的情况下）。
实验流程：
1）针对特定基因，设计miR RNAi序列，合成该序列并退火生成双链DNA；
2）将DNA与载体连接并转化；
3）测序验证miRNA序列的正确性；
4）细胞转染预实验，优化转染条件；
5）瞬时转染或稳定转染；
6）RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

客户提供：
1） 目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat种属）；
2） 细胞株和详细的细胞培养的操作步骤 ；
3） 一抗（如果需要Western blot检测）。

我们提供：
1） 构建好的表达载体和相应的甘油菌；赠送阴性对照甘油菌；
2） 测序报告 ；
3） 转染效率分析 ；
4） Knockdown结果。

质量保证：
针对某靶基因设计的3条miRNA序列，在转染效率>80％的前提下，我们保证至少有1个克隆可以达到70％转录水平的沉默效率。

服务说明:
1. RNAi技术服务不包括基因功能检测，如需检测，需要另外评估和收费；
2. 客户可以提供实验原材料，也可以查找本公司模板库、载体库、细胞库，也可以由我们公司代购；

目前，基尔顿生物科技（上海）有限公司，主营实验技术服务、SCI论文服务、动物模型构建、细胞株、elisa试剂盒等，欢迎广大科研爱好者前来咨询选购！

RNAi技术服务信息由基尔顿生物科技（上海）有限公司为您提供，如您想了解更多关于RNAi技术服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途