免疫组化

免疫组化根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。

免疫组化主要步骤
冰冻切片
1、将切好的冰冻切片，用4℃冷丙酮固定5～30min，PBS洗5～10min 3minX3
2、滴加0.3%TritonX-100，37℃孵育20～40min，PBS洗5～10min X3
 
免疫组化石蜡切片
1、将石蜡切片置于烤箱60℃1h，然后按常规脱蜡至水
2、滴加0.3%TritonX-100，37℃孵育20～40min，PBS洗5～10min X3
 
3、滴加3%H2O2，37℃孵育5～30min，PBS洗5～10min X3
4、滴加山羊血清封闭液，37℃孵育5～30min，倾去勿洗
5、滴加适当比例稀释的一抗，4℃孵育
6、取出切片，室温放置30～60min，PBS洗5～10min X3
7、滴加生物素化二抗，37℃20～40min，PBS洗5～10min  X3
8、滴加辣根酶标记链霉卵白素，37℃20～40min，PBS洗5～10min X3
9、配制DAB显色液，37℃显色10-30min，充分水洗
10、苏木素复染，水洗返蓝
11、酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片

客户提供
① 组织：新鲜或固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）组织样本；
② 细胞：新鲜（大于10E6）或固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）细胞样本；
③ 切片：石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片；
④ 实验材料：一抗；
 伯信提供
① 染色后的切片；
② 电子图片；
③ 实验报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）；

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