免疫荧光染色

细胞免疫荧光

我们拥有专业的实验室、先进的实验设备和经验丰富的科研技术人员。技术团队包括研究员（博士后）2人，助理研究员（博士）4人，核心研究员（硕士）15人，主要致力于基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用与推广。通过高度细分、全方位的服务平台，为广大客户提供了完善的技术解决方案和服务。目前，协助发表的SCI及国家核心期刊上的学术论文达两千余篇，涉及临床医学、肿瘤生物学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学、医学等诸多领域。  

一、服务介绍

免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

二、实验原理

将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

三、实验流程

免疫荧光单标记方法

免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。

1、所需材料与试剂

a, 培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%-70%的细胞。

b, 一抗、FITC或TRITC标记的二抗。

c, 4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃预冷20 min)。

d, 封闭液。

e, 0.01mol／LPBS缓冲液。

2、染色方法

a, 取出培养有细胞的盖玻片或glass-bottom培养皿，用0.01MPBS洗2-3遍。

b, 加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain

c, 加入4%多聚甲醛试问固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min。

d，正常阻断血清1:20封闭试问20-30 min，抑制IgG的非特异性结合。阻断血清选择与二抗同一种属的正常血清。

e, 去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃过夜。抗体以0.01 mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。

f, 0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min，0.3% TritonX 5 min，0.01 M PBS洗5 rain。

g, 加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。

h, 0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用滤纸吸干。

i, 90%甘油(PBS配制)封片。

j, 激光扫描共焦显微镜下观察，或于4℃避光保存。

免疫荧光双标记方法

免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子，当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些，应注意所用的一抗是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如：A抗体为多克隆抗体，来自家兔；B抗体为单克隆抗体，来自小鼠)。其次，两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠，且尽量远离，通常可以选择FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下，染色时两种一抗可以同时孵育，然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱，而另一种颜色比较强时，应考虑先孵育颜色较弱的二抗。其他步骤同免疫荧光单标记。

四、客户提供

细胞株或细胞爬片。注：细胞爬片不宜太密；细胞固定。组织切片，一抗

五、公司提供

基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析，荧光显微镜或共聚焦显微镜拍摄

实验周期：1-3周

科研实验外包:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建

9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等
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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途