Western Blot

利用抗原抗体反应，检测样本中目的蛋白表达量；检测基因蛋白表达量最常用的方法，半定量，无法提供基因的细胞定位等信息。

技术原理

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的各蛋白成分。

结果展示

用目的基因shRNA慢病毒感染A549细胞，3天后收集细胞，提取细胞总蛋白，用western blot进行检测，相比对照组，shRNA慢病毒感染后的实验组增殖凋亡相关蛋白表达量改变情况。

参考文献

Burnette WN. (1981). "'Western blotting': electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate—polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A". Analytical Biochemistry. 112 (2): 195–203.

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