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江苏齐氏生物科技有限公司
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| 参考报价： | 面议 | 型号： | DNA提取/RNA提取/基因合成 |
| 品牌： | 威斯腾 | 产地： | 重庆 |
| 关注度： | 41 | 信息完整度： |  |
| 样本： | 典型用户： | 暂无 |
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DNA提取/RNA提取/基因合成
DNA提取
实验介绍
从新鲜组织、血液、细胞、细菌等多种材料中提取基因组DNA，不同种类的材料中提取的基因组DNA量不同，而且差异也比较大，一般材料的基因组
DNA提取情况如下
材料种类 | 样品要求 | 起始量 | 收量 |
血液 | 新鲜血液及抗凝剂处理的全血 | 100 μl | 1 μg左右 |
培养细胞 | 离心收集的细胞 | 1×106 | 10 μg左右 |
动物组织 | 一般材料 | 100 mg | 5~10 μg |
植物 | 一般材料 | 100 mg | 5~10 μg |
细菌 | 菌悬液或离心收集后的菌体 | 1×108 | 1~2 μg |
客户须知
1、细菌、细胞样品需新鲜培养；动物组织、植物组织等样品取样后需液氮速冻。
2、用于提取基因组DNA的血液样品在4℃下可保存一周，-20℃下可保存1个月。
3、实验样品最好使用干冰运输。
4、结果提供基因组DNA、完整实验报告（电泳照片、OD值测定结果等）。
5、不同抗凝种类、抗凝程度、冻存时间等因素会导致血液样品之间差异较大、产量不同和价格有所不同。
实验周期
大约一周，根据量的多少而有所不同。
RNA提取
实验介绍
TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。
实验步骤
在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1. 提取组织RNA 时，每50～100mg 组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA 时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106 个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；
2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP 管中,在室温15~30C下放置5 分钟；
3. 在上述EP 管中，按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 盖上EP管盖子，在手中用力震荡15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3 分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15 分钟；
4. 取上层水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10 分钟,12000g（2℃～8℃）离心10 分钟；
5. 弃上清，按照每1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5 分钟，弃上清；
6. 让沉淀的RNA 在室温下自然干燥；
7.用Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。
基因合成
以前，实验室通常用PCR和RT－PCR的方法来获取某个基因片段，但是往往因为标本和模板等原因无法钓取该段基因。如今，我们采用化学合成的方法人工构建基因片段，即：全基因合成拼接技术。可以为广大的科研朋友服务。
基因合成是指在体外合成双链DNA分子的一门技术,与寡核苷酸合成有所不同，寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。可根据客户需求，我中心可以提供全基因合成服务，速度快、周期短、价格优惠。合成的基因可以根据客户的需求连接到不同的载体上，最终提供的产品包括菌株以及冻干的质粒和全基因完整的测序报告。
全基因合成的适用范围：
A: 自然界中无法以常规实验手段得到的基因
B:研究人员通过自己的意愿设计基因序列,以得到自然界中不存在的基因
C:对已知基因序列进行大量密码子优化重排,以期达到对该基因进行高效表达或获得新的生物特性等研究目的
服务优势：
A:合成基因最长已达到10.5KB,已完成基因超过10000条
B:可以合成重复序列(重复次数无限制).高GC(小于80%).发夹(参照每200bp小于3个发夹为限).连续单一碱基重复(GC小于15个,AT小于20个)等富含特殊结构的基因注:特殊结构基因合成的相关数据是根据我公司曾经成功合成过的基因序列所做的总结,以作为您设计基因序列时判断是否能顺利合成作为参考,具体还需以实际基因序列来定
C:基因可以克隆到客户提供或指定的表达载体上
D:免费提供基因结构设计.基因密码子优化,基因克隆表达方案设计等基因合成相关咨询服务.
全基因合成操作程序：
1、我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列，然后根据序列的具体情况设计合成方案。
2、在得到您认可后，我们将立即进行单链Oligo DNA 合成，DNA片段拼接等工作。然后把全长基因克隆到载体中，再通过DNA测序确认合成基因的正确性。
3、测序结果如果发现有错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。
结果提供：
A: 基因合成报告单一份
B: 含目的基因的质粒(不少于1ug)一份
C: 含目的基因的菌株一份
D：基因合成的测序图谱一份
威斯腾实验服务流程
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学检测 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SILAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒包装 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 生长因子芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| 炎症因子芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趋化因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 基因编辑动物 | |
| 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 | |
| 膜片钳实验 | ||
| 细胞生物学检测 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研设计指导&文章评估/润色 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 旷场实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 分子药理研究平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 生物膜片钳药物筛选平台 | 抗炎免疫药物药效学评价 | |
| 常规药物体外筛选 |
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