多基因同时转染的慢病毒载体设计包装

  慢病毒，一个强大的转基因及基因调控工具。KnockGene慢病毒可实现多个基因同时转染，多基因表达水平的调控。为您省去不必要的重复的筛选工作，节省宝贵时间。KnockGene 擅长，根据您的课题需求，设计符合课题后续实验要求的慢病毒载体。好的载体，让您的后续实验高枕无忧。

我们可为您设计，有以下要求的载体：

u  过表达，调控表达（对表达量有比较严格的要求）

u  敲低，RNAi，CRISPR

u  稳定转染，永久转染，传代细胞转染，原代细胞转染，在体转染

u  单载体CRISPR

u  多基因表达，长ORF

u  组织特异性表达，靶向性转染，cell targeting

u  非整合型慢病毒

u  全实验过程中涉及多个筛选基因的设计

u  全实验过程中涉及多个报告基因的设计

u  基因治疗载体的优化

除了设计各种难以程度不同载体之外，我们也乐于为大家提供实验方面的咨询，分享我们团队十多年来在各类实验中积累的经验，帮助大家克服实验中遇到的问题。欢迎联系：18610598977  /  010-80765889

案例3  有表达水平需求的双基因表达

客户需求：客户自己提供两段基因序列，需要在同一个载体上进行表达，并且不需要表达量太高，两个基因表达强度不要相差太大，需要带有筛选标记。

难点：同时表达两个基因，加上一个筛选标记基因，总共3个基因，本身难度不大。但是客户需要目的基因维持在一个较低的水平，就比较难于控制。

结果：针对这一要求，我们构建了双向启动子的表达病毒载体，两个目的基因由双向启动子驱动表达，抗性基因单独表达。由于客户其他载体上已经使用了puromycin和Blasticidin的抗性，这个载体选择了用Neomycin进行筛选。此载体病毒包装完全正常，转染细胞以后表达也符合客户的要求。

案例4 原代造血干细胞中CRISPR基因敲除

客户需求：在分离的原代造血干细胞中，使用CRISPR技术敲除掉目的基因，并且要尽可能的花更少的时间完成这一目的。

难点：   CRISPR的慢病毒由于Cas9基因本身比较大，达到4100bp以上，因此通常是采用双病毒载体，一个载体表达Cas9，另一个载体表达sgRNA，对细胞转染两次以后才能完成基因敲除。对于原代造血干细胞来说，本身体外培养时间有限，前面两次转染和筛选会消耗大量的时间，使得后面没有足够的时间完成实验。有一些慢病毒载体可用于单载体CRISPR应用，例如常见的LentiCRISPRv2，但是这些载体包装的病毒滴度太低，通常只有10⁵TU/ml量级，对于本来难转的原代细胞就很麻烦。

结果：使用我们独有的单载体CRISPR，构建了两个靶点的病毒载体，并且包装病毒。初始滴度均能达到10⁶ TU/ml以上。浓缩以后能够成功的转染细胞，使用载体带有的puromycin抗性进行筛选，获得稳定转染敲除病毒的细胞。在转染后7天的时候取细胞进行WB分析，两个靶点均有效的完成了目的基因的敲除，分别达到70%和90%以上。此载体在不需要单克隆筛选的情况下即完成了基因敲除，使这些难于实现的实验变得可行。

北京科诺科服生物科技有限公司

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途