蛋白质组学 | 生物样本收集的这些小知识您都get到了吗？ (上)

组织和生物体液是用于检测疾病和决定患者治疗的重要信息来源。

通过研究正常或疾病组织或者生物体液样本的蛋白质组特征，可以详细描述和量化与疾病状态相关的、定义的或导致疾病发生的蛋白质差异，以阐明病理生物学、改进疾病分类或确定新的治疗靶点^[1,2]。

如何合理准确地收集这些样本对于后续的检测实验来讲，显得尤为重要。本次小编为你倾情献上它们的合理收集方式，为您的样本保驾护航。

1.组织篇

样品制备在蛋白质组研究中起着重要作用，被认为是组织分析中最重要的步骤之一。

组织收样步骤

1. 首先准备好用于包装样本的铝箔或冷冻保存管，并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样本编号；

2. 每个样本的取材部位要尽量一致，准确切除所需组织后，剔除无关的干扰组织（血管、脂肪、结缔组织等）；

3. 迅速用预冷的生理盐水或预冷无酶水配制的1*PBS洗涤样本，去除残留血液和污染物；

4. 用无尘吸水纸快速吸干表面的液体，用灭菌的组织剪或手术刀将组织切成100mg左右小块；

5. 液氮速冻5min，保存于-80℃；

组织样本量要求：200mg /样本

2.体液篇

体液样本类型有：血浆和血清、尿液、脑脊液、耳屎、鼻分泌物、唾液、泪液、乳汁、支气管肺泡液、乳头吸液、羊水、胆汁、宫颈阴道液和精浆等[4]。体液样本类型较多，本篇重点介绍最常见的前四种体液样本收集方法，更多的需求可向小篇索要文献进行详细研究。

①血浆收样步骤

1. 建议使用紫色EDTA抗凝管采集血液；

2. 轻轻地上下颠倒混匀 8-10 次，立即将全血置于4℃或冰盒中正立放置；

3. 4℃，≤1300g（1200g或者1000g）离心10 min，取上清（血样需要在在1小时内进行血浆分离，依据抗凝管操作说明或者客户实验室血浆分离步骤进行操作）；

4. 用移液器将上清（血浆）转移到离心管中分装，【如果样本量体积较大，建议分装保存（每管分装200~300ul）】，可加入蛋白酶抑制剂（非必须）；

5. 液氮速冻5min，保存于-80℃。

血清样本量要求：200ul/样本

②血清收样步骤

1. 使用真空采血管收集血液；

2. 轻轻地上下颠倒混匀5-6 次；

3. 4℃，静置30~60min，让全血凝集；

4. 4℃，≤1300g（1200g或者1000g）离心10min，立即取上清；

5. 用移液器将上层淡黄色血清转移到离心管中（如果样本量体积较大， 建议分装保存（每管分装200~300ul）），可加入蛋白酶抑制剂（非必须）；

6. 液氮速冻5min，保存于-80℃。

血清样本量要求：200ul/样本

③尿液收样步骤

1. 收集中段晨尿；

2. 5,000g，4℃离心30min，去除细胞及碎片；

3. 用移液器取上清转移至进口的离子管，转移至-80℃的冰箱冻存。

尿液样本量要求：15ml/sample

④脑脊液收样步骤

1. 2000×g 离心5 min，（或使用0.22μm 滤膜过滤），取上清；

2. 液氮速冻5 min，保存于-80℃。

脑脊液样本量要求：2ml/sample

友情提示：以上样本量需求仅针对的是常规蛋白组学实验，如：TMT、Label Free ，DIA等，若需要做修饰蛋白组学，则需要增加3~10倍不等的用量。

百趣生物已检测样本类型

参考文献：

[1] Dapic Irena,Baljeu-Neuman Lucia,Uwugiaren Naomi et al. Proteome analysis of tissues by mass spectrometry.[J]. Mass Spectrom Rev, 2019, 38: 403-441.

[2] Gillette Michael A,Carr Steven A,Quantitative analysis of peptides and proteins in biomedicine by targeted mass spectrometry.[J].Nat Methods, 2013, 10: 28-34.

[3] Shabihkhani Maryam,Lucey Gregory M,Wei Bowen et al. The procurement, storage, and quality assurance of frozen blood and tissue biospecimens in pathology, biorepository, and biobank settings.[J].Clin Biochem, 2014, 47: 258-66.

[4] Lygirou Vasiliki ,Makridakis Manousos, Vlahou Antonia, Biological sample collection for clinical proteomics: existing SOPs.[J].Methods Mol Biol, 2015, 1243: 3-27.