干货丨流速慢、回收率低、平行性差？SPE操作技巧帮你轻松解决

       为什么SPE操作中会出现流速很慢或流速不一致、回收率低、平行性差的情况呢？这些问题可能很多小伙伴都遇到过。是小柱选择不合适，方法有问题吗？还是填料粒径分布不均一，装填松紧程度不稳定？其实SPE小柱每个批次的流速都有严格的质控范围，质控范围内的小柱能够保证流速的稳定性，质控范围之外的小柱会被作为异常品处理。那是不是采用稳定的方法，使用经出厂流速检测合格的小柱就能完全避免这些问题呢？

       其实还有一个非常容易被大家忽略的细节也会导致流速过慢：SPE小柱在运输过程中筛板和填料可能会出现微小的松动，导致空气进入填料（一般不容易被肉眼发现），含有空气的填料在气压的作用下导致溶剂流下速度很慢。说到这里大家就能够理解为什么同一批小柱会出现流速参差不齐的情况了。那我们在SPE实验操作中如何解决这个问题呢？

一  排气泡

1.1 排气泡的方法

√ 正压排除气泡

       样品数量比较少，填料量比较少，人工施加正压比较方便的情况下，可以使用注射器连接转接头的方式进行正压排除气泡。

√ 负压排除气泡

       样品数量比较大，填料量较多，人工施加正压不方便的情况下，可以使用真空泵连接固相萃取装置的方法，负压排除气泡。

1.2 何时排气泡？

       SPE操作中，一般包含活化平衡、上样、淋洗、洗脱四个步骤。是每一步都需要排气泡吗？当然不是，一般在填料之间有空隙的情况下需要进行排气泡的操作，比如加入活化平衡溶液之后，就需要进行排气泡的操作，使得溶液能够更好的与填料接触。

       还有一个容易被忽视的环节也是需要排气泡的，一般淋洗后需要进行抽干操作，抽干后填料间也会有空气进入，加入洗脱液后，也是需要进行排气泡操作的，否则大量的气泡也会严重影响洗脱液的流速以及洗脱效果。

1.3 排气泡的注意事项

       排气泡时，一般排除1/3柱管体积的溶剂即可排除填料中的气泡，切记不可以将溶液排干。防止排干，手动排气泡的速度不易过快，但也不能过慢，过缓的速度可能会排不出较大的气泡。

       如果活化平衡溶液一不小心排干了怎么办？只要重新加入活化溶剂进行排气泡就可以了。

       正确的排除气泡就可以在一定程度上避免流速过慢或流速不一致的情况了。那我们的回收率、平行性就能得到保证吗？还有一个神奇的小操作——抽干，同时做好这两步，才能让我们得到一个更好的实验结果。

二  抽干

 何时抽干？

× 活化平衡溶液、上样液不需要抽干

       活化平衡过程的主要目的有两个，一是清洗填料，洗去填料中本底，二是便于键合相分子的展开。主要是一些长链的官能团，例如C18在填料是干的情况下不是完全展开的状态，活化可以使填料官能团湿润和舒展，使之保持对目标化合物的最大吸附活性。

       所以活化平衡过程是不需要进行抽干的。

       有小伙伴曾经问到上样液是否需要抽干操作？上样液与淋洗液的极性一般是比较相似的，所以上样液也是不需要进行抽干的。

√ 淋洗液、洗脱液需要抽干

       淋洗液需要抽干的原因主要有两个：

       ①一般淋洗液与洗脱液的极性相差会较大（如淋洗液是水，洗脱溶剂为正己烷或二氯甲烷），两种溶剂不互溶或溶解性较差，这会导致洗脱液流不下来或流速较慢，阻碍洗脱溶剂与目标物的接触，洗脱效果差，回收率低。

       ②淋洗液如果是水的话，不进行抽干，会有部分被收集到洗脱液中，洗脱液如果进行氮吹的话，含水的洗脱液也是很难进行吹干的，如果进行长时间的氮吹将少量的水溶液吹干的话会导致回收率偏低的情况出现，所以淋洗之后是需要进行抽干操作的。

       洗脱之后会有部分洗脱溶剂残留在填料上，填料量较多的时候，甚至会残留1~2mL的洗脱液，无法完全回收洗脱液，导致回收率低，平行性差。为了保证洗脱溶剂与目标物完全被回收也是需要进行抽干的。

总结

√ 活化平衡、洗脱前进行排气泡。

√ 淋洗、洗脱后进行抽干。