测定饲料中单宁的方案

测定饲料中单宁的方案（分光光度法）

引言

目前，“饲料禁抗”已成为全球畜牧业生产的趋势，对提高畜产品质量安全、增加绿色优质畜产品供给、降低养殖生产成本、促进畜产品出口、实现畜牧业可持续发展意义深远。单宁作为替抗产品在动物生产中的应用具有一定的可行性。

关键词  单宁  分光  美析

原理

用丙酮溶液提取饲料中单宁类化合物,经过滤后,取滤液加钨酸钠-磷钼酸混合溶液和碳酸钠溶液，显色后,以试剂为空白对照,用分光光度计于760 nm波长处测定吸光度值,用单宁酸作标准曲线测定饲料中单宁含量。

仪器及试剂

美析UV-1500紫外可见分光光度计:带10 mm比色皿,可在760 nm处测定。

电子天平:感量为0.1mg.

粉碎机。

振荡仪。

单标线吸管:1 mL,10 mL,50 mL,A级。刻度吸管:5mL。

容量瓶:50 mL,100 mL,200 mL,A级。具塞三角瓶:250 mL。

中速定量滤纸。

除非另有说明,本标准中所用试剂均为分析纯,水符合GB/T 6682三级用水规定。

钨酸钠(Na₂O₄W·2H₂O).

磷钼酸(H₂Mo₁₂O₄₀P·XH₂O)。

钨酸钠-磷钼酸混合溶液:称取100.0g钨酸钠、20.0g磷钼酸,溶于约750 mL水中，移入1000 mL回流瓶中,加入50 mL磷酸,充分混匀,接上冷凝管,在沸水浴上加热回流2h,冷却,转入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度﹐摇匀,过滤﹐置棕色瓶中保存。室温下可保存14 d。

无水碳酸钠(Na₂CO₃)。

碳酸钠溶液(75 g/L):称取37.5 g无水碳酸钠，溶于250 mL温水中,混匀,冷却,稀释至500 mL,过滤到储液瓶中备用。室温下可保存7d.

丙酮(C₃H₆O)。

丙酮溶液(1＋1,体积比):分取等体积的水和丙酮(4.6),等体积混合,摇匀,即得。

单宁酸标准品(C₇₆ H₅₂O₄₆):含量≥95.0%。

单宁酸标准储备液:称取单宁酸标准品适量(精确到0.0001g),加适量水溶解,用水定容至100 mL,摇匀,制成单宁酸质量浓度约为1 mg/mL的标准储备液。在冰箱中4℃可保存5d。

单宁酸标准使用液;精密量取单宁酸标准储备液10.00 mL,置 200 mL容量瓶中,用水定容至200 mL,摇匀。此溶液单宁酸质量浓度为50 mg/L,用时现配。