新版药典中33种禁用农残检测核心问题及操作要点大放送

面对中药农残检测的你，是否也有如下疑问：

▎如何获取空白基质？

▎Q法加入冰醋酸的作用？

▎各种前处理方法、检测方法、净化填料如何选择？操作过程有哪些注意事项？

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33种禁用农药有什么变化难题？

首先不是普通的气相色谱方法，是操作更加复杂，要求更高的质谱检测，中药材（从类别分：根茎、叶、花、果实等，从成份分：挥发油、色素，淀粉等）的基质复杂，农药的品种繁多（33种，55个单体）对于质谱的基质干扰各不相同，难以建立通用方法适应全部品种。

其次是15版药典正文药材检测品种四个（甘草、黄芪、人参、西洋参），且只做有机氯，而33种农残是写入到通则里，针对的是所有植物类品种，方法中规定需要每个方法都制备基质对照以绘制标准曲线。这几乎需要每个品种都收集到对应的空白基质。在多数情况下基质效应不能忽略，并且基于浓度与样品不同，倾向于多变化，非常影响检测分析准确性。针对33种禁用农药，要求不得检出（低于定量限），因此对设备而言，灵敏度要求越高，对应的基质干扰越大。

最后33种农残不是简单定量的分析检测，而是标准就在定量限，如果药材农残分析结果高于检出限低于定量限，需要企业对其进行取样、前处理、仪器分析等过程的风险进行评估。

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树脂类，真菌类要测农残吗？

来源植物类的都要检测，但不必批批检，要做好风险管控。植物类中药分为9大类，包括全草类、根及根茎类、叶类、花类、果实及种子类、树脂类、菌藻地衣类、皮类、茎木类。

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方法学验证时的技术指标要求？

对于方法学验证的技术指标，我们给大家提供一个参考建议：

1.标准曲线线性 R>0.990;

2.重复性：RSD<10.0% (n≥6）;

3.加标回收率：一般应在 70%～120%之间。在满足重复性的情况下，部分农药回收率可放宽至60%～130%;

4.方法检出限∶当MRL≥0.1mg/kg，检出限应≤1/10MRL 当MRL<0.1mg/kg，检出限应≤1/5MRL。

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是否每种中药基质都需做基质空白？

药典规定每个药材都要做基质空白，如果是定性的话可以不用。空白基质样品是经检测不含待测农药的同品种样品。优先考虑选择"仪器完全未检出禁用农药"的基质，其次考虑"检出浓度"低于通则定量限的基质。

目前空白基质无法定供应渠道，需用实际样品筛查，并做好空白基质保留工作！

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如何筛查空白基质？

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直接提取或固相萃取与Q法的差异？

Q法在做标准曲线时，一个样品只能做一个点，所以配制一条标准曲线需要做六个样品，而采用直提的方法，做一个样品就能得到7ml以上的供试品溶液，所以配制一条标准曲线只需做一个样品。

Q法加了水进行提取，所以水溶性提取物比较多，虽然通过净化管进行净化，但是部分基质复杂样品的整体净化效果还是不足，导致回收率不好。

Q法相较于其它的方法，其基质效果是较强的，并且在气质上保留时间漂移也比较厉害。

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可否只用一种前处理方法做扩项？

由于中药品种太多，难以采用一种前处理方法覆盖大部分中药材，所以在进行扩项时，建议需要选择具有代表性的样品进行5种前处理过程的验证，这样后续才能面对大部分药材的检验。

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各种净化填料有什么作用？

无水硫酸镁：去除多余水分：PSA的净化效果和含水量有关，水量越高，净化效果越差；排除水分对气相色谱柱的影响

N-丙基乙二胺（PSA）：去除酸性及极性杂质，如有机酸、脂肪酸，部分色素及糖类

十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：除去非极性化合物，如挥发油、萜类、木质素、脂类、类胡萝卜素

 硅胶：除去极性较大的杂质，如糖类、鞣质等。

石墨化碳黑（GCB）：去除大部分色素和甾醇，主要用于叶类、花类(会对平面型分子有吸附)

HLB：去除挥发油、萜类、磷脂等，对色素去除能力差

值得注意的是使用石墨化碳黑（GCB）材料净化样品去除色素、挥发油效果明显，但是对于平面结构极性化合物吸附太强，而丙基乙二胺（PSA）同样用于除去样品中的有机酸类。两种材料即对禁用农药中的磺隆类组分产生吸附，都会导致回收率较低，甚至造成假阴性结果，在实际应用中根据药材特性适当减少用量。以液质目标考虑，优先选择HLB及QuEChERS法。

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方法学验证，添加回收实验可行吗？

目前来说，大部分基质的方法学验证方法都是做加标回收实验。主要是因为目前中药基质样品中要找到含有33种农残的样本很困难，所以只能用加标回收来做方法验证。由于中药生长情况，以及药用部位的差异比较大，所以加标回收实验和真正药材生长过程中的农药残留的原始状态还是有差异的，但是目前确实没有更好的方法。

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Q法加入冰醋酸的作用？

加入1%冰醋酸溶液：

由于植物类药材为低水分样品，加入水可削弱农药与基质之间的相互作用，提高提取率。

加入冰醋酸，可以改善三氯杀螨醇、p,p'-DDT等的响应在乙腈中急剧减少的现象。

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提取液为何选择乙腈？

在提取溶剂的选择上，一般以乙腈或者酸化乙腈为宜，相较于乙腈，甲醇和乙酸乙酯萃取杂质较多，对酸性和碱性农药的提取效果也不好，而且吸附剂的净化效果也不好，而丙酮加盐后难以盐析，使得水相和有机相难以分层。乙腈对农药特别是极性农药（甲胺磷、乙酰甲胺磷、拒嗪酮等）的提取效率较高，吸附剂净化效果较好，并且对基质中的脂肪、色素、蜡质等非极性成分提取较少，通过盐析也更容易除去水分。

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上液质的样品为何要加0.3ml的水？上气质的样品为何要加0.3ml的磷酸三苯酯？

加0.3ml水可改变定容液的极性，防止上液质的样品目标峰产生前拖尾。上气质的样品由于分析方法比较长，跑几次样品后可能导致目标峰的响应发生变化，所以需要加磷酸三苯酯进行响应校正。

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液质法中需取1ml提取液并加0.3ml水，有些样品会浑浊或分层，怎么处理？

部分样品加水后因为体系极性的变化，会产生浑浊或者沉淀，建议加水后再过0.22滤膜再上机分析。

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在做固相萃取第三法时 是否需要适当增加甲苯-乙腈洗脱要求20ml，把萃取柱里的样品充分洗脱出来？

一般不需要增加体积，因为随着洗脱体积变大，色素也会被一同洗脱出来，而大部分目标物在15ml左右就基本洗脱出来了。

另外，磺酰脲类除草剂（甲磺隆、等）的回收率偏低是由于NH2的酸碱吸附作用，增加洗脱体积无法改善。

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采用固相萃取1法和固相萃取3法时，磺酰脲类农药回收率很低，如何解决?

由于磺酰脲类除草剂为酸性农药，固相萃取一法中的PSA和三法中的NH2柱均会对其产生严重吸附，导致其回收率大大降低。可在分取提取液后，加入200ul的冰醋酸，再进行净化，冰醋酸的加入抑制了磺酰脲类除草剂的离子化，防止其被PSA和NH2柱吸附。

本文部分信息参考：国家药典委员会、安徽省药品监督管理局、蒲公英，文章仅供参考交流，侵删。