分析测试百科网 认证会员,请放心拨打!
诚信认证:
工商注册信息已核实!2020年mRNA疫苗的成功,让核酸药物成为整个制药行业炙手可热的赛道。也让同属于核酸药物的小核酸药物引起了广泛关注。其实早在1998年,就已经有小核酸药物上市。至今共15款小核酸药物获得FDA批准(其中2款ASO药物和1款适配体药物由于销售额过低等原因退市)。据统计,自2016年到2021年全球小核酸药物市场规模从0.1亿美元已增长至32.5亿美元,年复合增长率达217.8%。展示出巨大的增长潜力。
虽然同属于核酸药物,mRNA和小核酸药物的生产工艺大不相同。mRNA通常分子量较大,达上千nt,目前多采用以线性化质粒为模板进行体外转录(IVT)制备。而小核酸药物主要包括反义寡核苷酸 (ASO)、小干扰RNA (siRNA)、微小RNA (miRNA)、小激活RNA (saRNA)、信使RNA (mRNA)、RNA适配体(Aptamer),一般小于100nt,通常在20-30nt,目前制备工艺仍以固相合成工艺为主。
寡核苷酸合成是一个多步连续的反应,一个循环主要包括Detritylation(脱DMT),Coupling (偶联),Oxidation(氧化,O或S),Capping(封闭)四步反应,每个循环增加一个核苷酸单体,要求反应过程中的副反应尽可能少,否则目标产品的产率就可能很低,且纯化的难度会非常大。所以每一循环的合成效率和循环数(单体数)也就直接决定了最终产品的纯度和产率。
图 1 寡核苷酸合成过程——示一个循环
图 2 寡核苷酸单步偶联效率和最终收率计算
寡核苷酸固相合成的关键,包括所用试剂和单体的质量、合成工艺参数,也与所用设备息息相关。在核酸药物发展初期,英赛斯就敏锐的发现了相关市场对大规模核酸合成仪的需求,基于自有专利柱塞泵技术和对寡核酸合成工艺的研究,于2021年9月推出了Unique AutoOligo系列,目前产品已涵盖AutoOligo25,AutoOligo100,AutoOligo150,以及中试规模的AutoOligo600。制备量从10μmol 到50mmol。产品上市后已广泛应用于DNA,RNA以及各种修饰寡核酸的合成,并成功应用于长达85个碱基的寡核苷酸合成。
案例分享 案例1:85个碱基超长tRNA的合成 作为mRNA翻译过程中的一种辅助性分子,tRNA携带着特定的氨基酸,通过反密码子与mRNA链上的密码子结合,将对应的氨基酸转移到核糖体中,完成肽链的延伸。利用抑制性tRNA来治疗人类疾病的想法可以追溯到大约40年前。但由于当时其他的治疗策略(如基因替换)在小鼠身上产生了更好的结果,tRNA疗法研究进展停滞。直到2014年,葡萄牙癌症遗传学家Carla Oliveira领导的研究小组发现,抑制性tRNA具有治疗或预防无义突变(nonsense mutation)引起的遗传性癌症综合症的潜力。随着核酸药物的兴起,tRNA也成为了研究和投资的热点领域之一。 序列:RNA 85碱基 目标分子量:23890 合成仪器:AutoOligo100 合成柱:6.3ml合成柱 载体信息:CPG,1.8g 合成规模:57μmol 纯度:经一步C18反相纯化后达98% 图 3 案例1 一步纯化后质谱图 图 4 案例1 一步纯化后HPLC图谱
案例2:21碱基甲氧氟代RNA合成,高合成效率,高纯度 目标分子量:6596.3 合成仪器:AutoOligo600 合成柱:FineLINE 35 24ml 载体信息:Nitto Phase® HL UnyLinkerTM 250 合成规模:0.660mmol 单次偶联效率:99.5% 合成纯度:91.268% 图 5 案例2 合成色谱图 图 6 案例2 合成质谱 图 7 案例2 HPLC检测图谱
案例3:30碱基全硫代DNA合成 序列:DNA 30碱基 全硫代 目标分子量:9670 合成柱:6.3ml合成柱 载体信息:Nitto Phase® HL UnyLinkerTM 250 合成规模:0.175mmol 单次偶联效率:99.4% 纯度:85.372%
图 8 案例3 合成色谱图
图 9 案例3 质谱图 图 10 案例3 HPLC检测图谱
产品介绍 Unique AutoOligo 大规模核酸合成仪 Unique AutoOligo是一台灵活直观的全自动的寡核苷酸合成仪,可用于10μmol - 50mmol核酸样品的快速合成,适用于临床研究,医药开发以及分子诊断探针的合成。 Unique AutoPure 蛋白|核酸纯化系统 Unique AutoPure 是一款灵活直观的层析系统,用于纯化微克到克级的蛋白、多肽、核酸、多糖等目标物质。 Unique CDSystem是一款功能强大、性能先进、高稳定性的色谱数据管理系统,集成了仪器控制、方法管理、数据分析、标准曲线、报告编辑、用户权限管理、审计追踪、数字签名、网络数据等功能。