PRM靶向蛋白绝对定量

PRM（平行反应监视，parallel reaction monitoring）是一种基于高分辨、高精度质谱的技术，能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测，让质谱仅对这些肽段进行质谱信号采集，从而获取目标蛋白质定量信息的质谱技术。其原理以及技术对比如下图：

• 蛋白质组经典的研究思路

PRM与Western/Elisa

• PRM分析策略

      PRM/MRM定量技术是通过选择目标蛋白质的定量代表性肽段，让质谱仅对这些肽段进行质谱信号采集，从而获取目标蛋白质定量信息的质谱技术。分析策略主要分为三类：

1. 目标蛋白的相对定量

   此方法等同于传统的WB验证方法，进行的是半定量。

   
   

   

2. 标肽外标法绝对定量

   此方法等同于传统的Elisa验证方法，进行的是绝对定量

   
   

   

3. 重标肽内标法绝对定量

      此方法等同于传统的Elisa验证方法，进行的是绝对定量

        根据实验目的、需要验证的蛋白数量和样品数量可灵活选择不同的验证方式。

• 注意

      机时：简单样品如细菌、培养基等可以采用1小时机时，复杂样品如细胞、组织、血液等建议2小时。

      技术重复：除生物学重复外，建议每个样本进行3次技术重复。

      样本需求量同普通蛋白质组。

      PRM实验建议有前期DIA/非标实验数据支持，否则需要额外预实验机时，预实验样本建议每个condition取一个进行。

      如果是前期有ITRAQ/TMT数据，需要进一步评估其检测到的可行性。按经验，其中会一部分数据重现性较低，因为iTRAQ一般经过分级，而且其定量原理跟PRM有较大差异。不过可以参考iTRAQ的结果，选择目标蛋白，但是预实验一般都还是要做。

• 技术优势：

1、质量精度达到ppm级，灵敏度高；

2、不依赖抗体，可以实现对目标蛋白质/肽段的绝对定量；

3、通量高，可以实现几十种以上不同蛋白质的同时靶向验证。

PRM（平行反应监视，parallel reaction monitoring）是一种基于高分辨、高精度质谱的技术，能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。

PRM包括初步筛选采用的无标肽的目标蛋白相对定量、标肽外标法绝对定量、重标肽内标法绝对定量。根据实验目的、需要验证的蛋白数量和样品数量可灵活选择不同的验证方式。

PRM实验流程图

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