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参考报价: | ¥3250 RMB(人民币) | 型号: | DIA蛋白质组学检测分析 |
品牌: | 欧米克斯 | 产地: | 上海 |
关注度: | 237 | 信息完整度: | |
样本: | 典型用户: | 暂无 |
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传统的蛋白质组学采用数据依赖采集DDA策略(包括shotgun、Label free、iTRAQ/TMT以及SILAC等)的采集模式为DDA(Data Dependent Acquisition)。在这种模式下,质谱根据离子化的肽段母离子的强度,依次选择N个(一般10-20)强度最大的离子进入串联质谱,进行进一步碎裂,然后经过与模板蛋白质数据库比较确认。这种方法无疑丢失了大量有用的肽段母离子信息。此外,经过二级碎裂的二级谱图,在后期使用软件鉴定中也仅有少量谱图得到解析(约30%-50%),大部分谱图依然得不到有效利用。由于质谱选择离子的随机性,造成鉴定的重复度较低。又由于空间电荷效应的存在,大大限制了分析的动态范围,一些重要的低丰度蛋白得不到解析。
DIA(Data independent acquisition) 技术融合了传统蛋白质组学“鸟枪法”(shotgun)和质谱绝对定量“金标准”选择反应监测/多反应监测(SRM/MRM)技术的优势和特点。在DIA分析中,指定质荷比(m/z)窗口内的所有肽段都经过碎裂;分析重复,直至质谱仪覆盖整个m/z范围。这实现了准确的肽段定量,而不限于分析预先定义的肽段。DIA技术具有全景式扫描、数据可回溯等优势。DIA质谱技术被Nature Methods杂志评为2015年最值得关注的技术。被称为“Next Generation Proteomics”(新一代蛋白质组学技术)。
DIA实验流程
DIA分析流程
技术优势:
1、重复性大幅度提升
DIA的数据采集模式相比于常规非标定量DDA模式,有更少的缺失值,数据记录更为完整。
2、DIA定量准确性更高
定量方式由通过一级质谱信号定量,升级为由每个肽段通过多个二级质谱峰面积信号进行定量。定量信息更为全面,定量准确性提升,CV值下降
3、实验操作简单,周期缩短
与传统的iTRAQ/TMT/LFQ相比,通过构建DDA谱图库的模式,样本信息采集使用DIA模式,样本无需分馏分上机,极大缩短了每个样品的检测周期。
4、基于Orbitrap的DIA技术的优势
通常35,000-120,000分辨率采集,对复杂样品定性定量准确度高;
质量轴长期稳定地保持在1 ppm,无需内标校正或频繁外标校正,数据更放心、通量更高;
Amol (10-18 mol) 级的超高灵敏度,谱图质量高;
12-20 Hz 的超快扫描速度,同时保持 amol 级的超高灵敏度;
动态范围及线性范围达5个数量级以上;
DIA技术融合了传统蛋白质组学“鸟枪法”(shotgun)和质谱绝对定量“金标准”选择反应监测/ 多反应监测(SRM/MRM)技术的优势和特点。另外,DIA技术将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口,高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂、检测,从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的全部碎片信息。DIA技术具有全景式扫描、数据可回溯 等优势。
根据您的研究方向,可以选择发现式研究方案,剖析不同条件及处理下样品的成千上万种蛋白;亦或是靶向研究方案,对选定的蛋白质进行高通量定量。
DIA质谱技术被Nature Methods杂志评为2015年最值得关注的技术。
服务特色:
保证质量:客户拿到满意结果前,不收任何费用!
快捷周期:收到样本日起,最快两周内交付结果!
高效售后:24小时的售后服务,任何问题12小时内保证解决!
个性化方案:15年丰富经验,为您提供科学、严谨、全面的高性价比组学解决方案!
定性蛋白质组学
定性检测:将溶液内蛋白质分子或SDS-PAGE条带的扶着混合物酶解成肽段混合物,通过HPLC分离,串联质谱检测,最后结合相应数据库进行检索匹配,可同时鉴定出上千种蛋白质。
蛋白相互作用鉴定:通过液质联用技术(LC-MS/MS)对IP、Co-IP、Pull-down等纯化样本中的蛋白质混合物进行鉴定,可同时鉴定目的蛋白及其相互作用蛋白,从而构建蛋白质相互作用谱。
目的蛋白修饰鉴定:通过SDS-PAGE结合液质联用技术(LC-MS/MS)对IP所得蛋白质上的修饰位点进行鉴定,可对目前所有已知修饰类型及特殊的小分子在蛋白上的修饰位点进行鉴定。
定量蛋白质组学
通过研究不同生理状态、疾病状态、不同处理方法下蛋白质的表达量、修饰、亚细胞定位以及相互作用,寻找生物体在生理刺激、调控途径、生长发育、遗传育种中发挥重要重用的关键蛋白质。结合统计学和生物信息学,对其功能机制进行探究,是定量蛋白质组学的核心内容。定量蛋白质组学已广泛应用于药物研发、标志物诊断、肿瘤诊断及干预、疾病分型、机制研究、生物胁迫、生长发育等研究。
TMT/iTRAQ技术
TMT (Tandem Mass Tag) 技 术 和iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation)技术是目前差异蛋白质定量分析方法中通量最高、系统误差最小分析方法之一,可以同时比较2-11组样品的差异蛋白质表达。TMT/iTRAQ是一种间接定量技术,不同同位素标签对各个样品的多肽氨基基团进行特异性标记后,等量混合经串联质谱分析,得到的肽段谱图中各个样品的同位素标签作为差异基准进行定量计算。
蛋白质靶向定量技术PRM技术
PRM(平行反应监视,parallel reaction monitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的技术,能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。其优势在于省去了验证抗体有效性的繁琐步骤,同时能够实现几十种以上不同蛋白质的同时靶向验证。
PRM包括初步筛选采用的无标肽的目标蛋白相对定量、标肽外标法绝对定量、重标肽内标法绝对定量。根据实验目的、需要验证的蛋白数量和样品数量可灵活选择不同的验证方式。
修饰蛋白质组学
PTMs在多种细胞过程,如细胞分裂、蛋白分解、信号转导、调控过程、基因表达调控和蛋白相互作用中起到关键作用。这些修饰包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂化和蛋白水解, 并影响细胞正常状态及病理过程中的方方面面。
合作客户发表文章(部分)
In-depth proteomic profiling of left ventricular tissues in human end-stage dilated cardiomyopathy.
Oncotarget 2017 IF=5 ITRAQ
pGlyco 2.0 enables precision N-glycoproteomics with comprehensive quality control and one-step mass spectrometry for intact glycopeptide identification.
Nature Comm 2017 IF=13 GLYCO
Molecular basis for blue light-dependent phosphorylation of Arabidopsis cryptochrome 2.
Nature Comm 2017 IF=13 PHOSPHO
VHL deficiency augments anthracycline sensitivity of clear cell renal cell carcinomas by down-regulating ALDH2.
Nature Comm 2017 IF=13 SILAC
Plasma Membrane CRPK1-Mediated Phosphorylation of 14-3-3 Proteins Induces Their Nuclear Import to Fine-Tune CBF Signaling during Cold Response.
Molecular Cell 2017 IF=14 LFQ
Interleukin-6 Induced “Acute” Phenotypic Microenvironment Promotes Th1 Anti-Tumor Immunity in Cryo-Thermal Therapy Revealed By Shotgun and Parallel Reaction Monitoring Proteomics
Theranostics 2016 IF=8 ITRAQ+PRM
Label-Free Quantitative Phosphoproteomic Analysis Reveals Differentially Regulated Proteins and Pathway in PRRSV-Infected Pulmonary Alveolar Macrophages.
Journal of Proteome Res 2014 IF=5 LFQ
Detergent-Insoluble Proteome Analysis Revealed Aberrantly Aggregated Proteins in Human Preeclampsia Placentas
Journal of Proteome Res 2017 IF=5 DIA
High throughput and accurate serum proteome profiling by integrated sample preparation technology and single-run data independent mass spectrometry analysis
Journal of Proteome Res 2017 IF=5 DIA
Propafenone suppresses esophageal cancer proliferation through inducing mitochondrial dysfunction
Am J Cancer Res 2017 IF=4 DIA
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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途