实时定量PCR基因芯片/技术服务

                       
        功能分类基因芯片是生物学通路研究的重要工具。这种芯片将微列阵技术与特定生物学通路（specific biological pathways）的zei新知识有机结合, 可以大大缩短发现诊治各种疾病的生物学标志物(biomarkers)的时间。芯片上的基因包括了那些与研究对象有确定关系的基因，或至少是与研究对象的关系有待考证的基因。如果研究对象是某一生物学通路的基因，则使用针对该类基因的功能分类基因芯片比使用高密度表达谱芯片更加有效便利。

       
       美国SABiosciences公司（原SuperArray公司）在功能分类基因芯片领域具有国际领先地位，其开发的第二代功能分类基因芯片（Real-time PCR芯片），基于第一代功能分类Oligo基因芯片，结合了实时定量PCR的优点，可在一次实验中准确定量检测上百个基因的mRNA水平，将基因芯片的检测精度提高到与实时定量PCR相当的水平。功能分类PCR芯片：灵敏度高，样品的使用量低，每张芯片使用的总RNAzei少可为0.5ng；可观察到的动态线性范围超过105，可以同时检测表达量差异较大的基因；重复性高，Ct值的平均差异只有0.25个循环；分辨率高，可检测超过两倍的基因表达量变化；特异性好，PCR扩增产物条带单一。SABiosciences公司设计了超过100种功能分类PCR芯片，涵盖生命科学研究的各个领域。

        康成生物为您提供SABiosciences公司第二代功能分类基因芯片——实时定量PCR芯片技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，使用的定量PCR仪器为美国应用生物系统公司生产的荧光定量PCR仪ABI PRISM® 7700或ABI PRISM® 7900。PCR芯片技术服务的主要流程包括：RNA抽提、RNA质量检测、cDNA模板制备、实时定量PCR、数据处理及制作实验报告。

        SABioscienses还提供芯片定制服务（Custom PCR Arrays）。定制PCR芯片是根据不同研究需要量身定做的PCR芯片。定制PCR芯片被广泛应用于基因表达谱结果验证及特定信号通路的研究等。同时，它还特别适合于大样本的生物学标记物研究，无论这些生物学标志物是来自于研究者的前期研究成果、各种文献报道、还是表达谱芯片筛选的结果，SA Biosciences都能够灵活设计出符合需要的定制PCR芯片，获得高精确性、高灵敏度，高重复性的实验结果，缩短生物学标志物筛选的进程。

 

SABiosciences第二代功能分类基因芯片产品列表： 
        产品涉及：细胞周期、细胞凋亡、肿瘤、常见疾病、细胞因子与炎症反应、神经科学、信号转导、干细胞、药理与毒理等芯片200余种！

* 详情及完整基因列表请致电康成生物免费电话索取：400-886-5058；800-820-5058

康成客户实例——功能分类基因芯片（实时定量 PCR芯片）
EZH2 supports ovarian carcinoma cell invasion and/or metastasis via regulation of TGF-β1 and is a predictor of outcome in ovarian carcinoma patients. Carcinogenesis, 2010.

使用芯片：SABiosciences human Tumor Metastasis RT2 ProfilerTM PCR Array

    文章作者主要研究EZH2调控卵巢癌细胞侵袭及转移能力的分子机制。通过Human Tumor Metastasis PCR Array 检测了84个与肿瘤转移相关的基因表达变化情况，结果表明EZH2表达抑制前后的卵巢癌细胞，有5个基因发生了超过2倍的变化（TGF-ß1等）。经过western实验验证及相关性分析表明在卵巢癌中EZH2与TGF-ß1有着密切的联系：通过介导TGF- ß通路，EZH2调控卵巢癌细胞的侵袭和转移。这一研究也为卵巢癌的进一步治疗提供了潜在的药物靶点。
    
Real-time PCR芯片技术服务主要实验步骤：

1、客户样品RNA抽提
　　a)若实验对象为组织样品，取适量（50-100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml的RNA抽提试剂TRIzol（Invitrogen），匀浆后抽提RNA。
　　b)若实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，完全吸去培养液后加1ml的RNA抽提试剂TRIzol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
2、RNA质量检测
　　a)紫外吸收测定法测定RNA在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，以计算其浓度并评估RNA纯度。
　　b)使用甲醛电泳试剂（Ambion）进行变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性。
3、cDNA模板制备
　　按照逆转录酶（Invitrogen或Promega）使用说明将样品RNA逆转录为cDNA（根据样品RNA质量选用oligo dT或随机引物）。
4、实时定量PCR
　　根据说明将cDNA模板适当稀释后加入到实时定量PCR反应混合液中，然后在含有基因特异性引物的96孔板各孔中加入等量反应液，进行实时定, 量PCR反应。
5、数据处理
　　利用仪器配套软件计算各张PCR芯片中的每个基因的Ct值。zei后，采用△△Ct方法比较相应基因的表达量变化。
6、提供实验报告
　　包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR芯片实验结果及相关图表。

 

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