获USP和国标双双关注的营养素 — 胆碱 新检测方法（电雾式检测）实施

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刘兴国 郑喆

2022年11月USP更新了重酒石酸胆碱等相关品种含量及有关物质测定方法，于今年6月1日实施，方法采用了电雾式检测器（CAD）进行测定，这是又一个采用电雾式检测的品种收入USP。我国新颁布的国家标准GB5413.20-2022也对胆碱的测定方法进行了提升，采用酶比色法、离子色谱法和液相色谱-串联质谱法测定胆碱含量。这些方法的实施，改善了胆碱结构中缺少发色团，以往采用紫外检测器进行检测，干扰大灵敏度低的不足。

胆碱是卵磷脂的组成成分，也存在于神经鞘磷脂之中，是机体可变甲基的一个来源而作用于合成甲基的产物,同时又是乙酰胆碱的前体。是大脑健康、神经系统发育和肝功能正常运作，都离不开的一种重要营养素。

本文分别采用Z-Hilic和Trinity P1两种交换机理的色谱柱，结合电雾式检测器（CAD）对多维元素片中重酒石酸胆碱含量进行测定。电雾式检测器是一种高灵敏度、通用性强的检测器，可作为紫外检测器的良好补充，对弱紫外吸收化合物有非常好的响应。

图1 多维元素片

仪器配置

Thermo Fisher Vanquish高效液相色谱仪，

基座:Vanquish System Base，

泵：Vanquish Core Quaternary Pump（VC-P21-A），

自动进样器：Split Sampler CT（VC-A13-A），

柱温箱：Vanquish Column Compartment C（VC-C10-A），

检测器：Charged Aerosol Detector H，

色谱软件：变色龙Chromeleon 7.3。

图2  配置CAD检测器的Vanquish液相色谱仪

Trinity P1色谱柱方法

色谱柱：Trinity P1(150 mm×3.0 mm，3μm)，

流动相：溶液A为20mM乙酸铵（PH5.2），溶液B为乙腈，A：B =（80：20）作为流动相；

流速0.6mL/min，进样体积10 µL，柱温30 °C；

检测器采集频率10Hz，过滤常数5s，蒸发温度35℃。

对照品溶液和供试品溶液分别进样分析，测定结果见图3-4。

图3 对照品溶液测定谱图

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图4 供试品溶液测定谱图

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Z-hilic色谱柱方法

色谱柱：Z-HILIC (150 mm×4.6 mm，5μm)，

流动相：配制6.2g/L的醋酸铵水溶液，再用冰醋酸调节至pH值为4.7作为缓冲液，溶液A为缓冲液和乙腈（20：80），溶液B为缓冲液、水和乙腈（20：30：50），流动相梯度见表1；

流速0.5mL/min，进样体积10 µL，柱温30 °C；

检测器采集频率10Hz，过滤常数5s，蒸发温度35℃。

表1 流动相梯度

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对照品溶液和供试品溶液分别进样分析，测定结果见图5-6。

图5 对照品溶液测定谱图

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图6 供试品溶液测定谱图

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测定结果

取某品牌多维元素片（标示胆碱含量25.00mg/片）2片，进行样品制备和测定，结果见表2。两种方法测定结果进行比对，结果基本一致，偏差小于1.5%。

表2 样品测定结果

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总结

对比两种方法，在样品中其他组分干扰少的情况下，Trinity P1色谱柱方法测定时间短，基线噪音低，可以做到更低的检出限；Z-Hilic色谱柱方法胆碱保留强，更适用于复杂组分样品的分析。现代化的仪器方法提高了检测的准确度，保证了广大民众使用药品保健品的安全。

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