荧光定量PCR

瑞晶生物为您提供荧光定量PCR一站式解决方案，您只需准备好样品，其余全部由我们来为您完成。有染料法（SYBR Green）和探针法（Taqman、分子信标等）两种实验方法可供选择。实验中所用试剂全部为进口名牌产品，确保为您提供精确的检测数据，获得生物学相关的结果。
 

主要服务内容包括：

1.引物、探针设计与合成：根据基因序列设计并合成特异性real-time PCR引物和探针。
2. RNA抽提：
（1）组织样品：取100mg组织样品加1ml Trizol，匀浆后抽提RNA。
（2）细胞样品：取1×107个细胞，PBS洗涤三次，去PBS后加1ml Trizol，裂解后抽提RNA。
3. RNA质量检测：
（1）测定RNA在260nm和280nm波长处的吸收值，以计算其浓度并评估纯度。
（2）变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性。
4. 逆转录：使用逆转录酶（RNase H-）将样品RNA逆转录为cDNA。
6. 标准曲线制备：将标准品质粒做梯度稀释后，进行real-time PCR扩增和检测，以Ct值对拷贝数绘制标准曲线。
7. 定量PCR反应：将待测样品加入优化过的real-time PCR反应液中，进行real-time PCR扩增，检测目的基因和内参基因的Ct值。每反应均做3个平行复孔。
8. 数据分析：
（1）相对定量：使用△△Ct法计算目的基因在不同组间的表达差异。
（2）绝对定量：将样品的Ct值代入标准曲线，以对目的基因进行定量。
（3）熔解曲线分析：确定产物特异性。
9. 实验报告：
（1）详细实验步骤。
（2）数据结果和相关图表

您需提供：
1. 新鲜的组织样品或细胞样品，干冰保存。
2. 背景资料：目的基因的Gene ID、样品来源和mRNA丰度等。

收费标准及实验周期：
1. RNA提取费用：
少于20样品：150元/个
    20样品以上：120元/个
2. 定量PCR反应费用：
    一个基因每样品150元
    二个基因每样品120元
    三个基因以上100元/反应
3. 引物和探针合成费用：
    引物：1.6元/bp
    探针：1200元/条
4. 内参引物探针：免费
5. 实验周期一般为两周