抗体类知识汇总

1、景杰生物有哪些蛋白质修饰抗体?

答：按制备原理分为：单克隆抗体、多克隆抗体；

       按识别范围分为：泛抗体、位点特异性抗体；

       按修饰类型分为：常见类型修饰，Kac, Kme, phospho, K(gly-gly) 等；

       新型酰化修饰类型，Ksucci, Kcro, Kbuty, Kprop, Kmal等。

2、抗体产品的基本应用？

答：ELISA、Dot Blot、Western Blot、IF、IP、ChIP。

3、你们公司的泛抗体指的是什么抗体?

答：我们公司的蛋白质修饰泛抗体是相对于组蛋白位点特异性抗体而言的。泛抗体可以识别某一类含有某种修饰性氨基酸残基的蛋白质。公司拥有种类齐全的泛抗体类型，不仅有常见的乙酰化、磷酸化等泛抗体，还有独特的琥珀酰化、巴豆酰化、丁酰化、丙酰化、丙二酰化等泛抗体。

4、能否用泛抗体检测单一蛋白/IP复合物的修饰信号?

答：我们公司的蛋白质修饰泛抗体是指可以识别所有含该类修饰的蛋白质的抗体，与组蛋白位点特异性修饰抗体的区别在于不局限于某个蛋白的某个位点。如Lys三甲基化的修饰泛抗体可以识别所有含有Lys三甲基化的蛋白，而组蛋白H3K4Me3就只能特异性的识别组蛋白H3第4位Lys的三甲基化修饰。因此泛抗体是可以用来检测单一蛋白/IP复合物的修饰信号。

5、抗体生产的流程?

答：(1) 单抗：多肽合成→交联KLH为免疫原（抗原）→免疫→小鼠（取血检测WB、Dot、Elisa）→取脾脏磨碎→与骨髓瘤细胞融合（在PEG作用下融合）→选择培养（HAT培养基）为融合的细胞死亡，杂交瘤细胞存活→阳性克隆的筛选及克隆化→克隆扩增及大量制备McAb（打腹水→Protein G纯化（一步）→QC检测。

       (2) 多抗：多肽合成→交联KLH为免疫原（抗原）→免疫→兔子（取血检测Dot,WB泛抗体时不用）→检测合格（大规模取血，每次取30ml，大约要150ml）→纯化→QC检测→上市入库。

       注：合成多肽一般15个氨基酸，抗原决定簇是3-5个氨基酸。种族的差异性越强越易产生抗体，但修饰位点固定，我们的抗体很难做，导致修饰的抗体贵。

6、每批次抗体入库前，做过哪些验证?

答：我们需要做Dot、WB和IP质谱三项检测。Dot检测是在开发过程中进行的检测，检测抗体是否识别自己的免疫原以及是否和其他位点、其他修饰交叉，抗体的特异性和灵敏度。Dot检测合格后进行WB检测。位点特异性抗体，WB主要检测抗体在不同细胞裂解液中是否有变化。泛抗体，主要是看WB条带丰度是否好，使用其免疫原能否把条带信号竞争掉，或在经药物处理的细胞裂解液前后修饰水平是否有变化，检测泛抗体的广谱性，并为客户提供抗体的合适工作浓度。IP质谱检测主要是针对泛抗体而言，看抗体能否从一堆肽段中抓到带有某种修饰的肽段，能否用于修饰组学技术服务。

7、抗体产品用途? IP效果如何?

答：(1) 抗体可以用来做 WB，ELISA，Dot，IP，IF（免疫荧光）等；

       (2) 我们的泛抗体可以用来做肽段水平的IP且效果非常好，但不建议直接做蛋白水平的IP，效果不是很好。客户用我们的位点特异性抗体尝试做过IP，结论是可以的；

       (3) ChIP：我们有部分产品，做过相关的检测与验证，以确保能够用于ChIP实验。

8、景杰生物的修饰类抗体是否可以用于ChIP实验?

答：ChIP实验中由于Buffer体系调节恶劣，对抗体的要求比较高，即：结构稳定、亲和性高、选择性好。景杰生物的修饰性抗体现已验证出适用于ChIP的几种抗体，同时有多家实验采购我们的抗体用作ChIP实验，也反馈抗体可以很好的用于ChIP实验。

9、抗体可以做免疫组化么？

答：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。我们的抗体是可以做免疫组化、WB、ELISA等实验。

10、甲基化抗体中单甲基、二甲基、三甲基的抗体如何区分同一位点的一、二、三甲基的基团而互不交叉?

答：(1) 首先，我们在抗体研发过程中，抗原多肽的合成阶段已经区分开；

       (2) 其次，景杰生物的所有抗体都经过了严格QC验证，甲基化抗体也不例外。通过Dot Blot和ELISA验证抗体的同一位点不同修饰和相同修饰不同位点之间是否存在交叉。

11、景杰生物的开发的抗体有什么特点?

答：蛋白质修饰的泛抗体被认为是开发难度极大的研究应用类抗体，这是因为抗原的免疫性低，抗体的灵敏度不高，亲和性差以及很容易产生不同修饰抗体之间的交叉反应。为了保证抗体的亲和性与高特异性，我们开发了从抗原设计、抗原合成、免疫策略、抗体纯化到抗体检测的完整流程，以此为基础，开发出强亲和性、高特异性的蛋白质修饰泛抗体。

      除了保证产品的高质量外，我们还提供专业、完善的售前售后服务。如果您在我们抗体的WB应用方面有困难，可以由我们的专业人员帮助您完成实验。

12、景杰生物修饰类抗体的优势? 

答：(1) 鉴定并开发出多种类的修饰类抗体，与泛抗体；

       (2) 有别行业内普遍的进行一项检测，景杰生物在抗体生产中，所有抗体都进行严格的3项测试，表征抗体的亲和性、高度选择性、稳定性。对交叉反应的检测，从而保证抗体的高质量；

       (3) 国际知名药厂、知名大学哈佛，清华、北大等均大量使用景杰生物的修饰类抗体，得到了国际国内科研工作者的广泛赞誉；

13、市面上有很多组蛋白修饰的位点特异性抗体，你们的同类型抗体有什么优势?

答：市场上有诸多厂家提供多种组蛋白修饰的位点特异性抗体，尽管看起来有比较好的QC检测，但组蛋白修饰的位点特异性抗体的核心在于高特异性，即和其他结构类型的修饰没有交叉反应。随着现在对组蛋白修饰类型的深入了解，越来越多的组蛋白修饰类型被鉴定出来，因为，市场上销售的组蛋白修饰位点特异性抗体很可能和其他类型的修饰有严重的交叉反应。

在这方面，景杰生物是基于自身的核心优势和独特的抗体开发平台，对组蛋白修饰位点特异性抗体进行了严格交叉检验，通过特殊的技术流程确保了高特异性和高灵敏度。

14、用你们公司的抗体偶联树脂，进行蛋白富集，然后进行WB鉴定或质谱鉴定可以么？

答：(1) 首先，我们的抗体偶联树脂适用于修饰性肽段的富集，也可以用于直接的蛋白富集，但效果不佳，我们也不建议这么做。原因蛋白是大分子，直接用抗体偶联树脂来富集很困难，修饰性的抗体及偶联树脂都是识别被修饰的肽段残基，对于整个蛋白而言，修饰性位点可能在蛋白表面，也可能被蛋白三维结构包裹在内部，这样抗体及其树脂是很难识别到的。而蛋白经酶解后的肽段，修饰位点可以完全暴露在外面，肽段分子量很小，非常利于富集；

       (2) 其次，您如果是想鉴定目的蛋白某种修饰的有无，我们建议您直接用我们的修饰泛抗体进行WB鉴定，或者将蛋白进行SDS-PAGE，胶内酶解后鉴定。