氨基酸分析仪-氧化水解-检测饲料中氨基酸的含量

介绍

本样品为国内某知名饲料公司的新品猪饲料。据客户要求，使用Biochrom30+全自动氨基酸分析仪，采取氧化水解前处理方法，对其所含的氨基酸组分及含量进行分析（主要关注赖氨酸的含量）。结果表明该未知样中氨基酸各单个氨基酸含量的浓度见附页结果表。其中样品1氨基酸总含量为1.044 umol/mL，样品2氨基酸总含量为5.637 umol/mL，样品3氨基酸总含量为11.437 umol/mL。

一、样品前处理

1、 所用试剂

1.1 Loading Buffer：钠盐系统，pH 2.2

1.2 浓盐酸，浓度≥36%,优级纯

1.3 6mol/L 盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀

1.4 7.5mol/L 氢氧化钠：取30g氢氧化钠加水稀释定容至100mL

1.5 水：去离子水

1.6 预冷过的过甲酸溶液：30%双氧水:88%甲酸(1:9)混合，于室温放置1h，再放到冰水中冷却0.5h，制备完尽快使用

1.7 33.6%偏重亚硫酸钠溶液：33.6g偏重亚硫酸钠溶于100mL水

1.8 17种氨基酸标准品

2、前处理设备

1）分析天平:精度为 0.0001g

2）移液枪及枪头

3）一次性注射器及0.22um滤膜

4）低范围pH试纸

5）真空干燥烘箱

6）无油真空泵

7）电热平板及称量瓶

3、样品制备（GB/T 15399-2018 饲料中含硫氨基酸的测定）

A. 称取适量(约含蛋白质7.5-25mg)样品于20mL安瓿瓶中（切勿贴壁）；

B. 置于0℃冰水中冷却30min后加入2mL预冷过的过甲酸溶液（加液时需将样品全部润湿，但不能摇动）；

C. 0℃冰箱中反应16小时；

D. 加入33.6%偏重亚硫酸钠溶液0.5mL，混匀后，直接加入17.5mL 6mol/L盐酸，封口（无需抽真空）；

E. 110℃恒温干燥箱内水解22-24小时（注：开始水解时安瓿瓶切勿封口，等水解1h后再封口，否则容易引起炸裂）；

F. 冷却、混匀、开管，用水将内容物定量转移至50mL容量瓶中，用7.5mol/L的氢氧化钠中和至pH2.2，用pH2.2的Loading Buffer上样液定容，混匀，0.45μm膜过滤后，供上机用。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析仪分析方法参数：

1）色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm

2）反应单元温度：135°C

3）检测波长：570nm、440nm同时检测

4）分离程序：

运行时间：经分析时间+再生时间 89.19min

三、样品中氨基酸含量的计算

样品测定液氨基酸的含量按式(1)计算：

C_i = C_s/A_s × A_i× F ················· (1)式中:

C_i ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

C_s ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

A_i ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

A_s ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

F ———样品稀释倍数。

附、饲料中的氧化水解氨基酸其分析图谱及做样结果：

图1.  样品1

图2.  样品2

图3.  样品3