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重磅预告:流式细胞仪来了!

发布时间: 2020-05-25 12:36 来源:上海基泰生物科技有限公司
流式细胞仪
01概念:

流式细胞仪(Flow cytometer )是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。

它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度>95%。


02工作原理:

将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室,不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出,鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度,这样,鞘液就能够包绕着样品高速流动,组成一个圆形的流束,待测细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过检测区域。


流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在激光束的照射下,产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90 °方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。


这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,经光电倍增管接收后可转换为电信号,再通过A/D转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理,将分析结果显示在计算机屏幕上,液可以打印出来,还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。


检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达,其X轴为测量强度,Y轴为细胞数目。一般来说,流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数,这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据,既可以单独显示每个参数的直方图,也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。


细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷,当液滴流经带有几千伏特的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不予充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离。

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03应用范围和用途:

应用范围:

  • 白血病的诊断和治疗

  • 肿瘤细胞染色体的异倍性测定

  • 血栓与出血性疾病中

  • 细菌鉴定

  • 病毒感染细胞的识别和爱滋病感染者T4、T8细胞的记数。

  • 其它种类血液病的诊断和治疗监测

  • 网织红细胞的测定及临床应用


用途:

1、分析细胞表面标志。

2、分析细胞内抗原物质。

3、分析细胞受体。

4、分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量。

5、分析免疫细胞的功能。

流式细胞仪所能测量的细胞指标极多,如细胞形态,细胞表面及胞内抗原、众多经免疫荧光染色的蛋白,蛋白相互作用,蛋白磷酸化,细胞膜完整性,流动性,膜融合和翻转,膜电位,胞质Ca2+、PH值,细胞骨架成分,DNA、RNA含量,端粒长度,染色体核型分析乃至染色单体分选等等,还被用于进行液体的活检,包括ddPCR、NGS、CTC、还有ctDNA等。

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04市场发展:

流式细胞仪在中国市场的发展还是主要集中在科研、临床、生物产业三大块。科研市场相对开始饱和。除仪器的换代升级以外,主要增长点会是小型化个人化机器从平台进入独立实验室。从应用方向来看主要还是以免疫、肿瘤、单细胞研究为主。特殊的一些方向例如单细胞分选、微小颗粒的分析分选将会是未来的热点。仪器来说,目前激光数量与通道数量的发展基本满足了大多数实验的需求,发展方向还是以性能与易用性为主。


市场主流品牌:BD、伯乐、Luminex、珀金埃尔默、索尼、赛默飞、安捷伦、贝克曼、必达科生物、迈瑞、赛雷纳、厦泰生物、中生北控等。


2018年调查发现高校和科研院所为购买主力军,占比56.4%。医院占比32.5%,而政府只占10.5%。


受COVID-19影响,2020年Q1,全国共采购98台流式细胞仪,其中BD中标28台,占比28.57%;贝克曼、中生北控分别中标20台,占比20.41%;安捷伦、迈瑞分别采购3台、4台,占比为3.06%、4.08%。其余品牌只有1~2台中标。值得注意的是,中生北控的采购由河南疾控一家完成。


2020年1季度流式细胞仪的主要需求多集中在医院,疾控中心以及院校等单位,其中医院采购46台,占比46.94%;疾控中心采购26台,占比为26.53%;大学/研究院采购24台,占比24.49%;卫健委、公司各采购1台。不难看出,为应对突如其来的新冠病毒,一线医疗单位及科研高校成为了近期流式细胞仪采购的主力军。


重磅预告


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据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》及《新型冠状病毒肺炎重型、危重型病例诊疗方案(试行第二版)》显示,在重型、危重型患者的炎症因子升高而进行的细胞因子检测以及外周血淋巴细胞计数进行性降低;淋巴细胞中B淋巴细胞明显降低,CD4及CD8T细胞不断下降而进行的淋巴细胞亚群检测时都明确了流式细胞仪的应用。

我们基泰为了更好的服务于生物医疗行业,即将推出BD流式细胞仪,敬请期待。


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