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德国 ZEISS倒置显微镜

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PlasDIC—在显微细胞学中令人折服的创举


目前现状
在显微细胞学日常的工作中我们常常遇到厚样品和活动样品的观察问题,尤其是在用相差观察厚的物体时问题更为突出,重所周知在这种观察条件时只能得到带“光晕”的图象信息。
Nomarski DIC(微分干涉)技术可以对付细胞团或者组织等较厚的样品,但它是昂贵的并且仅仅只能应用在玻璃底的培养皿中,当然这种技术在日常应用中zei大的问题还是景深不足。
另外一些技术也可以用于厚样品的观察,例如基于斜照明原理的Hoffmann技术,不过这种技术调节十分困难并且存在测量误差。

来自ZEISS公司的PlasDIC技术
与现在的透射光干涉技术不同,PlasDIC技术无需在聚光镜中装补偿棱镜,因此样本是被自然光(例如非偏振光)照射;只有当经过DIC 棱镜之后的光才产生偏振,接着检偏器让通过的光线在样品平面产生振动并干涉;当聚光镜上狭缝光阑设定在λ/4,将呈现清晰的干涉图象;这种对比是可以变量调节的(它可以根据相应的物体而变化)。这在显微镜学中是首次相干和偏振的完美组合,它将整个样品区域的位置置于偏光敏感区域之外;PlasDIC技术也是第一个允许应用塑料培养皿的偏振光微分干涉技术。

结果和评估

图2显示的是相同区域的HEK(人胚肾)细胞在相差(左)和 PlasDIC技术(右)的观察效果。我们能够清楚的看到使用相差观察时,由于“光晕”现象,细胞较厚的区域的重现性是十分糟糕的;而如果在图象中有超过85%以上的区域为较厚细胞时这个问题将非常严重。而图2右中使用PlasDIC技术,不管观察区域样品是薄还是厚都可以得到漂亮重现的影象,并产生浮雕效果;因此可以得到更重要的细节特征。
结论:
A. 因为无须调中和变换光阑,使用PlasDIC技术的显微镜操作也更加方便,所以也不容易出错。
B. 它仅使用标准的物镜,在聚光镜上也不需要棱镜,有更高性价比。
C. 不需要使用带玻璃底的塑料培养皿,普通塑料培养皿即可。
所有以上诸点说明,PlasDIC技术活细胞显微观察的zei佳工具。




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