活细胞成像白皮书

自21世纪初，随着干细胞研究和组织工程的重大突破，类器官及其在显微成像中的应用取得了显著进展。已开发的多种类器官模型，如大脑、肝脏和肠道类器官，为研究器官发育、疾病机制揭示及治疗评估提供了新途径。同时，类器官成像技术的发展极大地促进了研究人员对这些复杂三维结构以细节和动态模式进行观察的能力。尽管如此，类器官研究仍面临多个挑战，包括维持样本活性、确保成像深度与分辨率，及处理和分析大量数据的需求

共聚焦显微镜物镜的发展，特别是用于观察厚样本的物镜，对匹配样本和周围介质的折射率至关重要，否则会影响成像深度。高数值孔径的油浸物镜虽然提供高分辨率，但当用于水样本时由于折射率不匹配而面临限制，导致球面像差。这影响了能够有效成像的样本深度，并降低了图像质量。

为了解决这些挑战，研究人员开始使用甘油作为一种折射率接近生物样本的介质，将样本置于甘油中，并使用甘油物镜进行成像。随着技术的进步，甘油物镜的设计和性能不断改进，成为现代显微镜中常见的物镜类型之一。

如今，大多数固定样本都使用基于甘油的Mowiol、Vectashield或类似混合物进行封片。这些介质的折射率接近80/20甘油/水混合物的折射率（ne=1.45）。甘油物镜（介质折射率1.46）是在这种介质中封装的样本的更佳选择。

由于折射率匹配，甘油物镜减少了散射和光损失，在广泛的波长范围内都具有较好的透明度，提高了图像质量和信号强度，因此可实现更深的成像深度