不溶性微粒小体积检测需要考虑的因素

包括单抗、重组蛋白和病毒载体在内的各类生物药，由于其产品组分的特殊性，一般采用注射方式给药，但注射给药存在较大的不良反应风险，其中就有来自不溶性微粒的危害。

对于注射剂中的不溶性微粒检测，各国药典都有相应的检测标准，包括我国药典ChP 0903，美国药典USP<788>和USP<789>，欧盟EP 2.9.19，日本药典JP和韩国药典KP，都对注射剂中10um，25um甚至50um以上不溶性微粒数量做了限定。

但常规的不溶性微粒检测方法，不管是采取单支还是多支混合，至少需要25mL液体样品才能检测，对于那些单支体积不到0.5mL但成本少则上千元的生物药，如何满足法规对不溶性微粒的检测要求，同时又节省昂贵样品的体积呢？

针对这种情况，美国药典USP<787>允许单次 0.2-5mL范围内的小体积检测，我国药典ChP 0903中也描述了25mL以下小体积注射剂的检测方法（如下所示）。

如果使用单次0.5mL甚至0.2mL的小体积检测，如何保证测试结果的准确可靠？

要实现这个目标，不溶性微粒检测仪和测试方法需要满足：取样针死体积要小、合适的流速和注射器、合适的样品管和准确吸取样品体积。

1、取样针死体积要小

这里说的死体积是指液体从取样针的头部到传感器检测窗口的这段距离对应的体积（如下所示的Tare Volume即死体积）

如果死体积过大会有什么问题呢？

譬如0.5mL死体积和1mL的样品体积。那样品在测试前首先要对0.5mL死体积中的液体进行替换，剩下0.5mL样品才能用于检测。所以，死体积越小越有利于节省检测的样品量，而这个死体积主要来自于取样针的具体规格。

贝克曼库尔特HIAC 9703+使用革命性的小取样针，0.047’’ x 3.2’’ 英寸规格，预抽死体积只有0.091mL，可以大大节省死体积中样品的消耗。

2、合适的流速和注射器

除了采用小取样针，还需要搭配1mL注射器和10mL/min的流速进行测试，若流速设置过大或采用大体积注射器，在取样过程中可能产生少量气泡，若遇到带有一定粘度的液体样品时，这个影响就会更大。

3、合适的样品管

对总体积＜3mL的样品不溶性微粒检测，可以考虑采用尖底塑料管装待测样品，然后安装到固定支架上检测（如下左图所示）。若样品总体积＞3mL，则可以采用小的玻璃瓶安装到固定支架上后测试（如下右图所示）。

4、准确吸取样品体积

相比常规单次5mL的取样体积，如何保证小体积取样的准确性将直接影响到测试结果？

贝克曼库尔特HIAC 9703+采用步进马达（如下图所示）驱动注射器的吸液和排液，相比注射器压力抽吸的方式测试体积精度更高，原因是步进马达的转速和停止的位置都可以通过脉冲信号的频率和脉冲数来准确控制，避免了抽吸式压力取样产生的惯性误差和累积误差。

那么满足以上4个条件的贝克曼库尔特HIAC 9703+不溶性微粒检测仪，在小体积不溶性微粒检测方面的表现如何呢？下面我们来看2个实验。

实验1：

通过对0.1-1mL不同体积的纯水进行测试，测试所用的液体体积通过称重法计算得到体积，不同体积下测试5次，将计算得到的液体体积列入下表，可看到除了0.1mL之外，HIAC 9703+ 的检测体积具有很高的准确性。

实验2：

在计数准确性方面使用Thermo Scientific的Ezy Cal悬浮液，按以上不同进样体积测试统计5um，10um和15um的颗粒数，以此来确定HIAC 9703+的计数精度。如下图所示，0.2mL以上体积测试，颗粒的计数精度基本都超过90%。

通过对以上两个实验案例的分析，我们可以看到HIAC 9703+对生物药注射剂按单次0.2mL体积检测，是可以实现颗粒计数和取样体积的高准确性，可以保证最 终测试结果的可靠性，所以该方法可应用于生物药注射剂的不溶性微粒质控放行。