Laura K. Johnston,美国芝加哥大学流式和抗体技术部副主任
什么是光谱流式?
检测获得的原始数据,通过数学模型解析后,便可确定是什么荧光染料。这样一来,只要存在独特的光谱特征,即使相似性很高的荧光染料,也可以被鉴别。例如,Alexa Fluor 647和APC,这两个在传统流式上不能共用的荧光素,却可以用光谱流式很好的区分开。(图2)
图1 –传统流式(上)与光谱流式(下)收集发射光信号的区别
我用Cytek Aurora能做些什么?
我们有一台5激光配置的Aurora,包括,紫外,紫,蓝,黄绿,红激光。
在Aurora上可以运行的颜色数量,取决于商业可用的荧光素数量及光谱的解析算法。理论上讲,用检测器数量减去2,就是可以解析的颜色数量,那么对于我们64检测通道的Aurora而言,可以解析的荧光素数量就是62个。目前,Cytek已成功实现30色方案的检测,所以我们现在做30色的流式方案是完全没有问题的。如果您想要做更大的panel,我们可以一起探讨,看看可以加入哪些额外的荧光染料。(编者注:Cytek最近已成功实现5激光40色的检测方案,可参考文章 将40个颜色放到一管里检测?)
至于荧光染料,Aurora可以检测绝大多数荧光素,包括,Brilliant violets, Alexa fluors, Super brights, Qdots, 死活染料等。
Aurora上还有一个体积计数器可用于细胞计数,以及一个96孔上样板。
图2 Cytek Aurora 能很好区分高度重叠的染料
在Cytek Aurora上做实验是种什么体验?
▌ 关于样本处理:样本的准备与染色过程与传统流式相似。
▌ 关于方案:任何在传统流式上开发的方案都可以在光谱流式上使用。我们强烈建议您注重方案设计,因为越大的panel,方案设计就更加重要。
▌ 关于软件:Aurora的软件与FACS DIVA相似,可以很容易就掌握。事实上,Aurora的设置会更加容易,如调节电压等传统流式所需要的操作,Aurora也是不需要的。
▌关于数据分析:由于光谱的解析是通过数学计算的,不能手动进行,所以Aurora单染管(也叫参比对照)的准确性很重要。更多信息可以参考我们的培训材料。现在,光谱解析是在Cytek SpectroFlo 软件和FlowJo 软件上进行的,一旦解析完成,你可以用任何可以分析.FCS文件的程序(如FlowJo, FCSExpress等)来处理数据。单就解析而言,SpectroFlo相较于FlowJo更加容易使用,所以我们推荐在使用SpectroFlo 进行分析。
图3 Cytek 5激光Aurora全光谱流式细胞仪