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HORIBA | 平时使用仪器遇到这些困惑，你怎么办？——拉曼/荧光/椭圆偏振光谱仪
使用光谱仪器时，如何巧妙制样？
针对不同的样品，测试方法有哪些区别？
仪器测试结果如何分析解读
11月13日，HORIBA的资深工程师们，就拉曼、荧光、椭圆偏正光谱仪器日常使用技巧，为大家分享了自己多年的宝贵（xue）经（lei）验（shi）。分享过程中，同学们也纷纷提出自己的问题，不知道是否也有你的困惑，我们一起看看吧：
荧光光谱
1.为什么样品信号之前的背景光平台不是平的？
在进行磷光寿命测试时，前端的小段曲线是由光源产生的，即激发光还没有完全消失，就开始了样品信号采集，后边部分属于光源消失后磷光衰减的信号，进行寿命拟合的时候只要选择后边尾部即可。
2.问水拉曼峰怎么测?
1）开启仪器；
2）将标准盛有三重去离子水的比色皿放入样品仓；
3）打开软件，选择Spectra——>emmission功能；
4）点击Run进行信号采集即可。参数详见如下：
激发波长350nm，水拉曼峰值，峰值波长397nm。实验条件：激发波长350nm，带宽5nm，0.5nm步进，发射波长扫描范围365~450nm，带宽5nm，积分时间1s；样品要求：必须是超纯水，三重蒸馏水或去离子水，HPLC级（>18.2 MΩ,<10ppb 溶解有机碳）或相同水质的水样。用4mL石英荧光比色皿
3.ms量级荧光寿命如何测量？
配置SpectrLED、Delta-HUB和相应的探测器，使用磷光寿命测试功能即可进行ms级的磷光寿命测量。具体测量及拟合方法可以联系我们应用工程师。
4.薄膜样品怎么测量？
将薄膜及其载玻片固定在固体样品支架上，即可进行稳瞬态荧光测试，但是有的薄膜样品散射较强，为了避免杂散光的干扰，一般需要使用相应的滤光片，另外Horiba提供前置测量附件，可以有效避免杂散光的干扰。
5.用HORIBA的荧光光谱仪测荧光寿命，是用上升沿还是下降沿拟合寿命的?
对于荧光寿命，拟合时上升下降沿的信号都要用到，对于磷光寿命，仅用下降沿部分拟合即可。具体拟合步骤及要点可与工程师联系。
椭圆偏振
1.请问老师，这个可以测量颗粒物表层吸附物质的厚度吗？纳米级别，烟尘颗粒
由于椭偏光斑在微米至毫米尺度，无法分析离散态的纳米级别颗粒表层
2.老师您好，请问衬底是石英片，可以测膜的厚度吗？
可以，只要薄膜光学透明即可使用椭偏测试
拉曼光谱
1.CLS那个没看懂？
简单的来说，CLS是数据统计的分析方法。夹峰法是以单个谱峰的峰强、峰面积、峰位的特性为拉曼成像依据。而CLS是以整张光谱或者某段光谱为依据，赋予不同的颜色。适用于已知混合物的拉曼成像。
2.细胞的那个是这么做的呀？
详细请见文章ACS Appl. Mater. Interfaces, 2017, 9 (7), pp 5828–5837，文章的拉曼部分在北京DEMO实验中心完成的，欢迎讨论。
3.用JobinYvonLabRam HR800仪器，325 nm 的激光测薄膜光致发光，有时PL谱的曲线有波动，就是线一抖一抖的，请问能怎么改善呢？能测到发光峰，但是曲线上有很多小的正弦波。
两个方面：一个需要标准样品测试，检验仪器本身是否有问题。另一个方面，考虑薄膜的厚度问题，是否刚好发生多次反射。之前有经历，特定的玻璃片上测样品，也有小正弦波，更换玻璃片之后就没有了。
4.那请问如果是贴壁细胞呢 直接光斑扫描？
贴壁细胞，做完封片，可以直接通过平台移动实现细胞成像。
5.指甲油有要求吗？指甲油不要涂到样品上？
指甲油本身有很好的拉曼信号，不能直接涂到样品上，建议选择亮色，这样能够看清楚指甲油的本身分布。若样品量比较大，建议选择大号的盖玻片，操作相对简单。
6.请问G/D的物理意义
G峰为石墨烯的特征峰，归属于sp2碳原子的面内振动，出现在1580 cm-1附近，该峰能够表征石墨烯的层数。D峰为石墨烯的无序振动峰，出现在1350 cm-1附近处，表征石墨烯中的结构缺陷或边缘。所以G/D峰，可以反映石墨烯的层数和缺陷分布。
7.测细胞必须要涂指甲油吗？
不是必须，封片的好处是减缓水份蒸发。
8.老师，做矿物的话激光波长用多少合适
大多数矿物532 nm激光比较合适，对于有荧光背景的，考虑红光激发。
9.半導體異物量測方式?測試過532,633,785 laser量測都只有螢光訊號,異物大小約1~3um
若异物在表层，可以考虑325 nm尝试下。若还是不行是否可以考虑用PL成像来区别异物。
10.如何衡量石墨烯条带的边缘质量？
见问题6，G/D比值成像及D峰成像都是不错的选择。
11.鲁老师，请问罗丹明溶液633直接测拉曼，如何计算光斑内有效分子数？
影响影子的计算方法我们在上一次的报告中有提到。详细可参见Phys. Chem. Chem. Phys., 2015,17, 21149-21157。文章是用XploRA仪器实现的，欢迎讨论。
12.样品中有水，可以用3D得到水分布吗
样品若是半透明的，可以实现水的分布的3D. 常见的地质样品，包裹体中的水分可以用3D表征。这是一篇文章，里面用拉曼证明了油水凝胶中的水分分布，你可以参考下。Nature Communications 8, Article number: 15911 (2017) doi:10.1038/ncomms15911。文章的拉曼部分在北京DEMO实验室完成的，欢迎讨论。
13.请问测拉曼时荧光效应太强，背底太高可以怎么改善？一般是某些样品会出现，跟样品有关系，可是又需要样品的拉曼数据
抑制荧光背景的方法：更换不同的激发波长；长时间激光照射光漂白；数值处理等。目前有效的是更换不同的激发波长测试。
14.请介绍一下实时在线原位拉曼技术？
在线原位技术是一个比较宽泛的命题，常见的有有机化学合成在线检测，高温高压在线检测，锂电池在线检测，电化学在线检测。若大家都有兴趣，我们可以专门利用一次讲座交流。
HORIBA科学仪器事业部
结合旗下具有近 200 多年发展历史的 Jobin Yvon 光学光谱技术，HORIBA Scientific 致力于为科研及工业用户提供先进的检测和分析工具及解决方案。如：光学光谱、分子光谱、元素分析、材料表征及表面分析等先进检测技术。今天HORIBA 的高品质科学仪器已经成为全球科研、各行业研发及质量控制的首选。
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