CRISPR/Cas9基因敲除技术服务

CRISPR/Cas9基因敲除技术服务

T7E1验证CRISPR/Cas9基因敲除用慢病毒，低至8888元！
T7E1验证CRISPR/Cas9基因敲除细胞株，低至9999元！！！

本技术服务提供基于CRISPR/Cas9技术的目的基因敲除用慢病毒或目的基因敲除的指定细胞株，并且无论是慢病毒和细胞株都经过金标准T7E1法的验证。特别是目的基因敲除的多克隆细胞株，仅需30天即可获得并可用于目的基因敲除后的功能检测。

碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务项目表：

碧云天CRISPR/Cas9技术服务优势：

1. 技术新：基于最新的CRISPR/Cas9技术，有效敲除目的基因并避免脱靶效应。

2. 标准严：可以提供经过金标准T7E1法验证的慢病毒或细胞株，也可以提供经过Western blot验证的多克隆细胞株。

3. 筛选快：碧云天自行研发了基于CRISPR/Cas9技术的sgRNA快速筛选和验证体系，确保了可以在最短的时间内完成sgRNA的筛选和T7E1法验证，同时也降低了筛选成本。

4. 时间短：目的基因敲除的多克隆细胞株仅需30天即可完成；单克隆细胞株一般在60天完成。

5. 价格低：CRISPR/Cas9基因敲除多克隆细胞株低至11111元，基因敲除用慢病毒低至8888元。

碧云天CRISPR/Cas9技术服务选购建议：

1. 对于CRIPR/Cas9技术不是很熟悉的用户，我们优先推荐选择T0411或T0413直接获取目的基因敲除的多克隆细胞株，这样就直接可以开始目的基因敲除后的功能研究了。希望在多个细胞株中研究目的基因敲除后的功能时，我们优先推荐选择T0411和T0428或T0413和T0431。T0413和T0431增加了Western blot验证，敲除效果更有保障。

2. 对于CRISPR/Cas9技术比较熟悉，能自行进行多克隆或单克隆细胞株的筛选并能自行进行T7E1鉴定的，在经费许可的情况下我们优先推荐选择T0408，仅当经费比较紧张的情况下可以考虑选择T0405。需要注意的是，T0405尽管经过我们的筛选，很可能后续T7E1验证会取得成功，但我们无法保证后续T7E1验证一定成功。希望在多个细胞株中研究目的基因敲除后的功能时，在经费许可的情况下我们优先推荐选择T0411和T0428，或T0413和T0431，仅当经费比较紧张的情况下可以考虑选择T0408或者T0405。对于T0408和T0405，我们推荐选择经过T7E1验证的T0408。仅当需要对大量基因进行基于CRISPR/Cas9技术的基因敲除时，可以考虑选择T0405，此时可以节省一些费用并总是会检测到大部分基因被顺利敲除的。

3. 对于经费充足的情况下可以考虑选择T0418，直接获得经过测序验证的单克隆双等位基因敲除细胞株，省心省力。

碧云天CRISPR/Cas9技术服务流程：

1. 用户下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书，发送至service@beyotime.com。

2. 双方确认并签订技术服务协议书，按照协议内容进行技术服务。

碧云天CRISPR/Cas9技术服务项目明细：

T0405 CRISPR/Cas9基因敲除用慢病毒(无T7E1验证)全额预付特价8555元，30天内保证完成。基于CRISPR/Cas9技术，提供一种经特有技术验证的目的基因敲除用慢病毒(含对照病毒)。技术标准：提供一种经验证的能表达靶向目的基因的sgRNA和Cas9并能有效敲除目的基因的慢病毒。该慢病毒有puromycin抗性，感染细胞后可以用puromycin筛选目的基因敲除的细胞株，不保证T7E1验证效果和Western检测效果。最终提供靶向目的基因的慢病毒10⁸ IU (Infectious Units)，靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)10⁸ IU；报告单一份(含提交物品清单和病毒感染方法等)。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0408 CRISPR/Cas9基因敲除用慢病毒(T7E1验证)全额预付特价8888元，30天内保证完成。基于CRISPR/Cas9技术，并经金标准T7E1验证的目的基因敲除用慢病毒(含对照病毒)。技术标准：提供一种经验证的能表达靶向目的基因的sgRNA和Cas9并能有效敲除目的基因的慢病毒。该慢病毒有puromycin抗性，感染细胞后可以用puromycin筛选目的基因敲除的细胞株，有相应模式细胞的T7E1验证结果，但不保证Western检测效果。最终提供靶向目的基因的慢病毒10⁸ IU (Infectious Units)；靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)10⁸ IU；报告单一份(含提交物品清单、相应模式细胞的T7E1验证结果和病毒感染方法等)。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0411 CRISPR/Cas9 基因敲除多克隆细胞株(T7E1验证)全额预付特价9999元，30天内保证完成。基于CRISPR/Cas9技术，并经金标准T7E1验证的目的基因敲除多克隆细胞株(含对照细胞株)。技术标准：提供经验证的一个通过CRISPR/Cas9技术把目的基因敲除的定制细胞株(多克隆，可以用于目的基因的功能研究)。最终提供感染靶向目的基因的Cas9慢病毒后筛选获得的多克隆细胞2管，每管细胞数量不少于100万；感染靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)后筛选获得的对照细胞2管，每管不少于100万；包含目的基因敲除的T7E1验证结果的报告单一份(含提交物品清单、T7E1验证结果和细胞培养方法等)。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0413 CRISPR/Cas9 基因敲除多克隆细胞株(T7E1验证、WB验证)全额预付特价11111元，30天内保证完成。基于CRISPR/Cas9技术，并经金标准T7E1验证和WB验证的目的基因敲除多克隆细胞株(含对照细胞株)。技术标准：提供经验证的一个通过CRISPR/Cas9技术把目的基因敲除的定制细胞株(多克隆，可以用于目的基因的功能研究)。最终提供感染靶向目的基因的Cas9慢病毒后筛选获得的多克隆细胞2管，每管细胞数量不少于100万；感染靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)后筛选获得的对照细胞2管，每管不少于100万；包含目的基因敲除的T7E1和WB验证结果的报告单一份(含提交物品清单、T7E1和WB验证结果、细胞培养方法等)，其中WB验证用户需提供有效的相应一抗。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0418 CRISPR/Cas9基因敲除单克隆细胞株(双等位基因敲除)全额预付特价25999元，60天完成。基于CRISPR/Cas9技术，并经测序验证的目的基因敲除单克隆细胞株(双等位基因敲除)。技术标准：提供经验证的一个通过CRISPR技术把目的基因敲除的定制细胞株(单克隆，双等位基因敲除，经测序验证)。最终提供感染靶向目的基因的Cas9慢病毒后筛选获得的单克隆细胞2份，每份细胞数量不少于100万；感染靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)后筛选获得的对照细胞2管(非单克隆)，每份不少于100万；包含报告单一份(含提交物品清单、测序结果和细胞培养方法等)。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0421敲除用慢病毒与敲除多克隆细胞株全额预付特价15666元，30天内保证完成。靶向同一个基因的基于CRISPR/Cas9技术的慢病毒和目的基因敲除的多克隆细胞株(含对照细胞株)。技术标准：靶向同一个基因的基于CRISPR技术能有效敲除目的基因的慢病毒和基于CRISPR技术的目的基因敲除细胞株。相当于靶向同一基因时，服务T0407和T0411的打包服务。最终提供的实验结果为T0407和T0411技术标准之和。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0423相同基因敲除用慢病毒再次订购全额预付特价4598元，15天内保证完成。再次订购之前相同的基于CRISPR/Cas9技术能有效敲除目的基因的慢病毒(含对照病毒，仅限同一订购单位的同一订购人)。技术标准：同T0405或T0407。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0425相同基因敲除多克隆或单克隆细胞株再次订购全额预付特价1268元，7天内保证完成。再次订购之前相同的基于CRISPR技术能有效敲除目的基因的多或单克隆细胞株(含对照细胞株，仅限同一订购单位的同一订购人)。技术标准：同T0411、T0413、T0415或T0417。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0428相同基因敲除的不同多克隆细胞株(T7E1验证)全额预付特价6666元，30天内保证完成。同时或后续制备靶向相同基因的基于CRISPR/Cas9技术经T7E1法验证能有效敲除目的基因的不同多克隆细胞株(含对照细胞株，仅限同一订购单位的同一订购人)。技术标准：同T0411。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0431 相同基因敲除的不同多克隆细胞株(T7E1验证、WB验证)全额预付特价10999元，30天内保证完成。同时或后续制备靶向相同基因的基于CRISPR/Cas9技术经T7E1法和WB验证能有效敲除目的基因的不同多克隆细胞株(含对照细胞株，仅限同一订购单位的同一订购人)。技术标准：同T0413。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0435 相同基因敲除的不同单克隆细胞株(双等位基因敲除)全额预付特价19888元，45天完成。同时或后续制备靶向相同基因的基于CRISPR技术双等位基因敲除目的基因的不同单克隆细胞株(含对照细胞株，仅限同一订购单位的同一订购人)。技术标准：同T0418。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0437其它CRISPR/Cas9相关技术服务请发送邮件到service@beyotime.com咨询。

T0438 100个定制基因敲除细胞裂解液90天内完成。基于CRISPR/Cas9技术，并经金标准T7E1验证的100个定制基因敲除多克隆细胞裂解液。技术标准：提供经T7E1验证的100个定制基因敲除的多克隆细胞株裂解液。293细胞或HeLa细胞任选其一，可覆盖人6000种常用基因；以全细胞裂解液或冻干粉形式提供，同时提供敲除前细胞裂解液参照；用于抗体的阳性、阴性测试及抗体特异性检测，为抗体质量检测提供更直观的证据。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

T0439 100个定制基因敲除细胞株90天内完成。基于CRISPR/Cas9技术，并经金标准T7E1验证的100个定制基因敲除多克隆细胞株。技术标准：提供经T7E1验证的100个定制基因敲除的多克隆细胞株。293细胞或HeLa细胞任选其一，可覆盖人6000种常用基因；最终提供感染靶向目的基因的Cas9慢病毒后筛选获得的多克隆细胞株各2管，每管细胞数量不少于100万；感染靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)后筛选获得的对照细胞2管，每管不少于100万。下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书

碧云天CRISPR/Cas9技术服务示例：

基于CRISPR/Cas9技术的X基因敲除细胞株的构建

1. 根据用户提供的目的基因名称和基因ID，查找基因序列。

2. 设计3-5条sgRNA序列。构建含puromycin抗性的sgRNA和Cas9表达质粒。

图1. 含puromycin抗性的sgRNA和Cas9表达质粒的图谱信息。

3. sgRNA切割靶基因DNA活性检测：

图2. sgRNA切割靶基因DNA活性检测和筛选。图中显示sgRNA1和sgRNA3有较强的切割活性，而sgRNA2的切割活性很弱。

4. 选择对靶基因DNA切割活性强的sgRNA和Cas9表达质粒，包装慢病毒并测定滴度。同时包装靶向GFP或无任何靶向的对照慢病毒并测定滴度。

5. 慢病毒感染目标细胞株，并用puromycin进行筛选。

6. 筛选获得的细胞株进行T7E1验证。

图3. 基因敲除细胞的T7E1法验证。敲除位点上下游设计PCR引物，提取细胞基因组DNA后进行PCR扩增。对PCR产物进行变性和退火处理后加入T7E1 (核酸内切酶，只切割碱基错配的DNA)，敲除(knockout, KO)细胞的PCR扩增产物经T7E1消化后可见明显的切割条带，说明预期的敲除位点附近存在大量sgRNA引导Cas9切割形成的缺失突变。

7. 目的基因敲除的Western检测验证(由于涉及是否存在合适抗体用于检测的问题，本项内容不包含在常规的技术服务范围内，如果需要须另行协商)。

图4. 目的基因敲除的Western验证。筛选获得的阳性细胞传代2次后，取细胞制备蛋白样品，每孔的蛋白上样量为20μg。用抗目的蛋白X的抗体进行检测，检测Actin作为内参。标示sgGFP的为感染了靶向GFP的慢病毒后筛选获得的细胞，标示sgX的为感染了靶向目的基因X的慢病毒后筛选获得的细胞。

8. 目的基因敲除细胞的功能分析参考图5和6(本项内容不包含在常规的技术服务范围内)。

图5. 在诱导细胞死亡的条件下，只有敲除基因X的细胞可以存活。原始细胞(naive)及阴性对照细胞(sgGFP)约80%死亡。

图6. X基因敲除影响蛋白M的磷酸化。X基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中蛋白M被特定处理诱导的磷酸化被完全抑制(A)。在通过CRISPR/Cas9技术X基因敲除的细胞中进行相同的实验，实验结果与MEF结果一致(B)。

CRISPR/Cas9基因敲除技术服务信息由 上海碧云天生物技术有限公司为您提供，如您想了解更多关于CRISPR/Cas9基因敲除技术服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途