Description: 默克生命科学已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准,您可以免费获取详细信息。
外泌小体(Exosome)是一种囊泡结构,直径通常在30-150nm,常见于正常体液和病理样本,培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体,其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流,影响和调控着多方面的生理功能,包括肿瘤发生、免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现,外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利,成为体外诊断、biomarker研究的新热点。
分泌和膜出芽生成囊泡
免疫调控
神经元-神经胶质通讯
肿瘤演进
近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。
1 经典超速离心法制备外泌体
超速离心法是制备外泌体的金标方法,
但是有所局限:
设备非常昂贵
对经验要求较高
操作时间长,有一定的安全风险
100,000×g离心,操作时长超过5个半小时
在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。
2 过滤+超滤
简单两步,快捷制备外泌体
根据起始样品量选择合适规格的过滤和超滤工具
制备的外泌体用于细胞学或动物实验前需要做无菌处理
Ultrafree离心式微滤管
TIPS
无血清样品选择3KD孔径为了尽可能提高外泌体的回收率。
有血清样品选择100KD/500KD孔径为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中的白蛋白影响。
样品体积大于30mL时可以考虑用超滤杯或Centricon 70,注意超滤杯在200mL以内时吸附损耗可能较超滤管有所增加。
不同方法制备外泌小体产量比较
默克生命科学超滤法制备的外泌小体电镜照片(放大倍数87000×)。小体直径16 -82nm,有些达到485nm。
进一步精制……
经过简便的“微滤澄清+超滤富集”两步法,制备的外泌体可直接用于下游各种分析,如果需要纯度更高的外泌体,可以采用抗体包被的琼脂糖珠或磁珠进一步纯化。
抗体包被磁珠亲和纯化
默克生命科学已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准,相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心,用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题,真是惠而不费,不亦乐乎?
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