固相萃取柱应用，人尿中乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)和硫酸二乙酯(EtS)

本应用描述了Biotage ISOLUTE^® NH₂ 固相萃取柱萃取人尿中乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)和硫酸二乙酯(EtS)。

(乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)和硫酸二乙酯(EtS))

Ferrara等最近发表出版物,使用ISOLUTE^®NH₂固相萃取柱,处理制备人体尿液中酒精的生物标志物的方法。本方法每年可以成功处理6000个样品。

据报道,尿液浓度为500ng/ml,方法重复性RSD%<20%。最低检测定量限为100ng/mL,这种方法主要的优点是不需要蒸发步骤而直接进行液相色谱-质谱/质谱分析。

样品处理流程
板子:ISOLUTE NH2 100mg/2mL柱,货号p/n:470-0010-A
样品预处理:100uL尿中加入HCl(6M,50uL)和1mL乙腈,离心
活化:2mL甲醇活化每个柱子
平衡:2mL水平衡各个柱子,然后含有0.2%(v/v)乙酸的乙腈2mL平衡
上样:1mL/min的速度上样总体积2.15mL
干扰物洗脱:用1mL己烷洗干扰物,正压下干燥柱子10分钟。
洗脱分析物:10mM的甲酸盐/甲酸铵d (pH 3, 2 x 750 µL)洗脱分析物。需要不干模式。

(液相参数,Agilent 1200 HPLC)

(质谱参数,API4000串接液质谱)

(分离谱图)

 (留存的样品A-F)

本研究优化参数并提出了建议,最初方法的开发在Biotage 美国应用实验室,然后办法转移ARUP奥雅纳,进一步研究方法的性能,与真正的病人以前的样本进行验证的裁判方法。正交测量的结果表明,可以提供相同的诊断数值。

黄慧等发表的《酒精滥用的生物学标志物》就综述了酒精生物学标志物。酒精生物学标志物有两类:间接生物学标志物和直接生物学标志物。 间接生物学标志物反映酒精对人体器官、组织或机体生化反应的毒性作用,直接生物学标志物为酒精代谢的产物,尤其是那些存在时间较长、非氧化性的代谢物。作为酒精生物学标志物需要具备一定的准确性,即足够的灵敏度和特异性。
常见的间接生物学标志物包括r-谷氨酰转肽酶(GGT)、谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、糖缺失性转铁蛋白(CDT)、红细胞平均体积(MCV)。常用的直接生物学标志物包括葡萄糖醛酸苷(EtG)、硫酸乙酯(EtS)、磷脂酰乙醇(PEth)、脂肪酸乙酯(FAEEs)。由于酒精生物学标志物的无创性和便捷性,用途甚广,在常规临床工作、急诊室、戒酒康复机构、酒后驾驶、肝移植酒精摄入的评估、胎儿酒精综合征等方面均有应用;为酒精相关问题的预防、诊断、跨学科合作打开了新视角。

酒后驾车是一个世界性的交通安全问题。我国每年因交通事故死亡中约25%-30%与酒后驾车有关。由于乙醇在体内代谢较快,一般饮酒后6-8h体内已检测不到乙醇。对于疑酒后驾车肇事后逃逸者,在一定时间后体内检测不到乙醇,因此需要寻找新的途径证明肇事者是否为酒后驾车。
乙醇进入人体后,有一部分乙醇与尿嘧啶核苷-5‵-二磷-葡萄糖醛酸结合成乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronide,EtG)由于其比原体乙醇的半衰期长,当血液中乙醇浓度低于检测限时,体内仍可在一定时间内检出EtG。因此血液中EtG的检测及评价越来越为人们所重视 ,特别是酒后驾车肇事逃逸案件中,抽血与事故发生时间隔过长,血液中往往测不出乙醇成分,但可以检测血液中EtG。

订货信息:

货号:470-0010-A ISOLUTE NH2 100mg/1 mL 数量:100个
货号:PPM-48 Biotage正压歧管,48孔 ,数量:1个
货号:C103198 TurboVap LV 100/120V,无架子 ,数量:1个
货号:C103199 TurboVap LV 220/240V ,无架子 ,数量:1个

(PPM-48 Biotage正压歧管,48孔)

高级附件:

大流量氮气发生器Maestro或EURUS(法德赛),用于液质联用仪持续供气,大于99%的纯度,分子筛长寿面技术降低仪器维护费用。

文献:Donata Favretto & Alessandro Nalesso & Giampietro Frison & Guido Viel & Pietro Traldi & Santo Davide Ferrara, Int. J. Legal Med. (2010) 124:161–164

来源于:Application Note AN818.V.1 ©2014 Biotage : A No-Drydown SPE Method for Biomarkers of Alcohol Consumption in Human Urine

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